公开(公告)号：CN112921072B

公开(公告)日：2024-10-25

申请号：CN202110390689.3

申请日：2021-04-12

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 张剑 ,  林明曦 ,  金奕滋

IPC: C12Q1/6809 ,  C12Q1/6886 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种脑转移相关候选基因的CRISPR/Cas9文库高通量筛选方法，该方法包括构建脑转移相关基因的sgRNA文库，将sgRNA文库进行慢病毒包装，感染稳定表达CAS9蛋白的宿主细胞，并筛选以获得稳定表达sgRNA文库的细胞，然后，将慢病毒感染后的细胞接种于免疫缺陷的小鼠颅内及脂肪垫，最后，将颅内成瘤及皮下成瘤的肿瘤组织取出，提取基因组DNA后，对sgRNA的靶向区进行二代测序建库，通过筛选前后sgRNA的丰度变化，进而找出脑转移相关候选基因。该方法建立了脑转移相关基因高通量筛选技术，能够准确、高效地挖掘调控脑转移的关键基因，为脑转移预防和治疗提供新靶点、新途径。

公开(公告)号：CN112921072A

公开(公告)日：2021-06-08

申请号：CN202110390689.3

申请日：2021-04-12

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 张剑 ,  林明曦 ,  金奕滋

IPC: C12Q1/6809 ,  C12Q1/6886 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种脑转移相关候选基因的CRISPR/Cas9文库高通量筛选方法，该方法包括构建脑转移相关基因的sgRNA文库，将sgRNA文库进行慢病毒包装，感染稳定表达CAS9蛋白的宿主细胞，并筛选以获得稳定表达sgRNA文库的细胞，然后，将慢病毒感染后的细胞接种于免疫缺陷的小鼠颅内及脂肪垫，最后，将颅内成瘤及皮下成瘤的肿瘤组织取出，提取基因组DNA后，对sgRNA的靶向区进行二代测序建库，通过筛选前后sgRNA的丰度变化，进而找出脑转移相关候选基因。该方法建立了脑转移相关基因高通量筛选技术，能够准确、高效地挖掘调控脑转移的关键基因，为脑转移预防和治疗提供新靶点、新途径。