公开(公告)号：CN110699407B

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN201910989379.6

申请日：2019-10-17

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 顾宏周 ,  张俏 ,  夏凯

IPC: C12P19/34 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明公开了一种借助I类和II类水解性脱氧核酶高效制备长单链DNA的方法。该方法主要包括设计并构建重组噬菌粒，获得噬菌粒环状单链DNA步骤，同时采用I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体切割环状单链DNA，纯化回收酶切得到的所述长单链DNA。利用这两类能快速水解DNA的脱氧核酶，可代替限制性内切酶，低成本的实现对辅助噬菌体法制备出的DNA序列的特异性切割，大量、经济、高纯度制备任意长度和序列的单链DNA。

公开(公告)号：CN110643606B

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN201910989374.3

申请日：2019-10-17

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 顾宏周 ,  张俏

IPC: C12N15/113 ,  C12P19/34

Abstract: 本发明公开了多个感应锌离子并能快速水解DNA的II类脱氧核酶突变体，II‑R1a，II‑R1b，II‑R1c，II‑R1d，所述突变体是基于II类脱氧核酶II‑R1的序列，设计“退化”的DNA文库，利用指数富集的配体系统进化技术，体外筛选分离获得的切割位点处碱基分别为G、A、T、C时，水解DNA活性强的II类脱氧核酶突变体。本发明的II类脱氧核酶突变体II‑R1a在50℃下切割反应速率最快，反应1小时切割效率可达80％。

公开(公告)号：CN110699407A

公开(公告)日：2020-01-17

申请号：CN201910989379.6

申请日：2019-10-17

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 顾宏周 ,  张俏 ,  夏凯

IPC: C12P19/34 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明公开了一种借助I类和II类水解性脱氧核酶高效制备长单链DNA的方法。该方法主要包括设计并构建重组噬菌粒，获得噬菌粒环状单链DNA步骤，同时采用I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体切割环状单链DNA，纯化回收酶切得到的所述长单链DNA。利用这两类能快速水解DNA的脱氧核酶，可代替限制性内切酶，低成本的实现对辅助噬菌体法制备出的DNA序列的特异性切割，大量、经济、高纯度制备任意长度和序列的单链DNA。

公开(公告)号：CN110643606A

公开(公告)日：2020-01-03

申请号：CN201910989374.3

申请日：2019-10-17

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 顾宏周 ,  张俏

IPC: C12N15/113 ,  C12P19/34

Abstract: 本发明公开了多个感应锌离子并能快速水解DNA的II类脱氧核酶突变体，II-R1a，II-R1b，II-R1c，II-R1d，所述突变体是基于II类脱氧核酶II-R1的序列，设计“退化”的DNA文库，利用指数富集的配体系统进化技术，体外筛选分离获得的切割位点处碱基分别为G、A、T、C时，水解DNA活性强的II类脱氧核酶突变体。本发明的II类脱氧核酶突变体II-R1a在50℃下切割反应速率最快，反应1小时切割效率可达80％。