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1.

发明授权
基于PCR的无缝构建小RNA表达载体的方法有权转让

公开(公告)号：CN108251444B

公开(公告)日：2022-09-27

申请号：CN201810241433.4

申请日：2018-03-22

Applicant: 复旦大学附属肿瘤医院

Inventor： 柳素玲 , 周磊 , 盛丹丹

IPC: C12N15/63 , C12N15/113

Abstract: 本发明提供了一种基于PCR的无缝构建小RNA表达载体的方法。具体地，本发明的方法包括步骤：(1)提供目的载体和用于扩增的第一引物和第二引物，其中第一引物为正向引物而第二引物为反向引物，所述的目的载体是环化的载体；(2)以所述目的载体为模板，用所述第一引物和第二引物，在聚合酶存在下进行扩增反应，从而获得扩增产物；(3)在无缝克隆重组酶作用下，对扩增产物进行环化反应，从而形成环化的表达载体，即为用于表达小RNA的表达载体。本发明的方法大大简化shRNA、sgRNA和crRNA等常用小RNA表达载体克隆过程，节省实验者的时间，降低劳动量，提高成功率，降低构建成本。

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