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公开(公告)号：CN116355834A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310324542.3
申请日：2023-03-29
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明公开了一种小鼠肝星状细胞的永生化制备试剂、试剂盒及方法。本发明利用II型胶原酶、链霉蛋白酶、DNA酶降解胶原纤维降低细胞悬液粘度；利用EDTA螯合钙离子进一步避免细胞粘连聚集，利用Opti‑Prep离心进一步分离纯化获得原代HSC；将小鼠原代HSC经过两次传代，使其他难以离体长期保持活性的细胞死亡，进一步纯化小鼠HSC。然后使用携带G418抗性基因及SV40TAg基因的逆转录病毒转染小鼠HSC，使细胞内抑癌基因失效无法表达，从而防止细胞分裂停滞，使其获得无限增殖能力，既保留了原始细胞的许多表型，又具有相对稳定的功能状态。利用G418抗性筛选出获得高活性和功能的永生化的小鼠HSC。
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公开(公告)号：CN118207317A
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202410316087.7
申请日：2024-03-20
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12Q1/6883 , G01N33/68 , C12N15/113 , A61K45/00 , A61K45/06 , A61K31/713 , A61P1/16
Abstract: 本发明公开了Ntn1作为靶点在预防和治疗非酒精性脂肪性肝炎中的应用，属于生物医药技术领域。本发明发现Ntn1在肝脏HSC中特异性表达，其表达水平在NASH进展过程中显著增高，揭示了Ntn1可作为NASH诊断和治疗的潜在靶点。本发明发现靶向抑制Ntn1或其受体能抑制HSC细胞活化及胶原蛋白的表达，减轻纤维化的进展，并提供能够有效缓解NASH的针对Ntn1及其受体的特异性干扰RNA，为临床上NASH肝纤维化疾病的预防和治疗提供新策略。
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公开(公告)号：CN118421779A
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410363551.8
申请日：2024-03-28
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12Q1/6883 , A61K45/00 , A61K48/00 , A61K38/18 , A61P1/16 , G01N33/68 , C12N15/864 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了Gdf10作为靶点在制备预防和治疗非酒精性脂肪性肝炎药物中的应用，属于分子生物医疗技术领域。本发明首次揭示Gdf10可作为NASH肝纤维化的保护因子成为NASH潜在的治疗靶点。此外，本发明构建肝脏特异性过表达Gdf10基因的腺相关病毒载体系统，所述过表达载体能够减轻NASH肝纤维化。本发明为Gdf10作为靶点在制备治疗NASH肝纤维化药物提供了扎实的研究基础。
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公开(公告)号：CN116286605A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310318508.5
申请日：2023-03-29
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种制备纤维化肝脏单细胞悬液的试剂、试剂盒及方法。本发明的试剂至少包括链霉蛋白酶、DNA酶、II型胶原酶、HBSS、NaHCO3、EDTA、FBS和Optiprep分离液。本发明利用链霉蛋白酶降低明胶和粘蛋白的粘度、DNA酶降解DNA后避免分离过程中破碎细胞释放DNA增加悬液粘度、II型胶原酶良好的解离能力和消化肝脏的作用，EDTA螯合钙离子进一步避免细胞聚集；通过在分离过程中加入以上成分，高效获得与细胞外基质成分充分解离的肝脏单细胞悬液。同时分离过程中全程利用HBSS液配制缓冲液，其含有的葡萄糖为活细胞提供能量供给，最大程度的避免在细胞分离过程中因能量物质缺乏造成细胞转录组改变。
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