公开(公告)号：CN117802200A

公开(公告)日：2024-04-02

申请号：CN202310019333.8

申请日：2023-01-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王漱阳 ,  黄新华

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了一种游离DNA的应用分离回收方法，步骤包括：1)cfDNA加长；2)单链特异线性富集；3)亲和素修饰的非磁性微球结合反应。本发明还公开了一种基因甲基化检测方法，步骤包括：1)cfDNA加长；2)重亚硫酸盐处理；3)线性放大；4)单链特异线性靶标富集，亲和素修饰的非磁性微球结合反应；5)单分子标记反应；6)单端特异增强指数扩增；7)双端非特异指数扩增。本发明还公开了用于上述方法的试剂盒和基因甲基化检测方法的用途。本发明通过加长原始DNA模板减少DNA损失、线性放大补偿重亚硫酸盐处理造成的DNA损失、单分子标记去除非靶标DNA的竞争干扰，提高了甲基化测序的灵敏度和特异性。

公开(公告)号：CN117802201A

公开(公告)日：2024-04-02

申请号：CN202310019340.8

申请日：2023-01-06

Applicant: 复旦大学

Inventor： 王漱阳 ,  黄新华

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基因突变检测方法，该方法包括以下步骤：1)以cfDNA为模板，用与模板对应的5’端带有测序公共接头序列、中部带有随机碱基编码序列、3’端带有与模板靶标分子互补序列的特异引物，进行单分子标记反应；2)以单分子标记反应产物为模板，进行单端特异增强指数扩增反应；3)进行双端非特异指数扩增反应，获得文库并测序。本发明还公开了用于上述方法的检测试剂盒和上述方法的用途。本发明通过对cfDNA模板用特异引物延伸法进行高效单分子标记反应，去除非靶标DNA的竞争干扰，再对单分子标记产物进行单端特异增强指数扩增，提高了建库的特异性和建库质量，从而提高了检测的特异性和灵敏度。