基因突变及甲基化检测方法、试剂盒及用途

    公开(公告)号:CN117802201A

    公开(公告)日:2024-04-02

    申请号:CN202310019340.8

    申请日:2023-01-06

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 王漱阳 黄新华

    Abstract: 本发明公开了一种基因突变检测方法,该方法包括以下步骤:1)以cfDNA为模板,用与模板对应的5’端带有测序公共接头序列、中部带有随机碱基编码序列、3’端带有与模板靶标分子互补序列的特异引物,进行单分子标记反应;2)以单分子标记反应产物为模板,进行单端特异增强指数扩增反应;3)进行双端非特异指数扩增反应,获得文库并测序。本发明还公开了用于上述方法的检测试剂盒和上述方法的用途。本发明通过对cfDNA模板用特异引物延伸法进行高效单分子标记反应,去除非靶标DNA的竞争干扰,再对单分子标记产物进行单端特异增强指数扩增,提高了建库的特异性和建库质量,从而提高了检测的特异性和灵敏度。

    用于预测早期非转移性结直肠癌预后的微RNA生物标记物及检测方法

    公开(公告)号:CN104673883B

    公开(公告)日:2018-01-19

    申请号:CN201310632099.2

    申请日:2013-12-01

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物医学技术领域,涉及预测早期非转移性结直肠癌的微RNA(microRNA)生物标记物及检测方法。其中,早期非转移性结直肠癌表示Dukes’A和Dukes’B腺癌。具体地,本发明涉及鉴别早期非转移性结直肠癌不同预后的一或多种哺乳动物靶细胞的分子标记的诊断试剂盒,所述试剂盒包含多种核酸分子,每种核酸分子编码miRNA序列,其中多种核酸分子中的一或多种在靶细胞中及在一或多种对照细胞中差异表达,且所述一或多种差异表达的核酸分子一起代表核酸表达特征,所述核酸表达特征是鉴别早期非转移性结直肠癌不同预后的指征。本发明进一步涉及使用所述生物标记物及检测方法预防或治疗所述疾病的相应方法及药物组合物。

    用于肠源exo-miRNA表达谱分析的组合物和方法

    公开(公告)号:CN118127152A

    公开(公告)日:2024-06-04

    申请号:CN202211531126.2

    申请日:2022-12-01

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明涉及结直肠癌血浆肠源外泌体中微小RNA(miRNA)表达谱分析的组合物和方法。特别地,本发明涉及用于诊断结直肠癌、监测癌症治疗和/或治疗结直肠癌的血液分子标记物诊断试剂盒,该试剂盒包括多核酸分子,每种核酸分子编码一微小RNA序列,其中一或多种核酸分子在结直肠癌血浆和健康对照血浆中有差异表达,其中一或多种差异表达的核酸分子一起代表一个核酸表达特征,该核酸表达特征是预示结直肠癌存在的指征。本发明进一步涉及使用该核酸表达特征确定结直肠癌、同时预防或治疗这种病症的相应方法。最后,本发明直接关系预防和/或治疗结直肠癌的药物组合物。

    用于预测早期非转移性结直肠癌预后的微RNA生物标记物及检测方法

    公开(公告)号:CN104673883A

    公开(公告)日:2015-06-03

    申请号:CN201310632099.2

    申请日:2013-12-01

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物医学技术领域,涉及预测早期非转移性结直肠癌的微RNA(microRNA)生物标记物及检测方法。其中,早期非转移性结直肠癌表示Dukes’A和Dukes’B腺癌。具体地,本发明涉及鉴别早期非转移性结直肠癌不同预后的一或多种哺乳动物靶细胞的分子标记的诊断试剂盒,所述试剂盒包含多种核酸分子,每种核酸分子编码miRNA序列,其中多种核酸分子中的一或多种在靶细胞中及在一或多种对照细胞中差异表达,且所述一或多种差异表达的核酸分子一起代表核酸表达特征,所述核酸表达特征是鉴别早期非转移性结直肠癌不同预后的指征。本发明进一步涉及使用所述生物标记物及检测方法预防或治疗所述疾病的相应方法及药物组合物。

    游离DNA分离回收及基因甲基化检测方法

    公开(公告)号:CN117802200A

    公开(公告)日:2024-04-02

    申请号:CN202310019333.8

    申请日:2023-01-06

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 王漱阳 黄新华

    Abstract: 本发明公开了一种游离DNA的应用分离回收方法,步骤包括:1)cfDNA加长;2)单链特异线性富集;3)亲和素修饰的非磁性微球结合反应。本发明还公开了一种基因甲基化检测方法,步骤包括:1)cfDNA加长;2)重亚硫酸盐处理;3)线性放大;4)单链特异线性靶标富集,亲和素修饰的非磁性微球结合反应;5)单分子标记反应;6)单端特异增强指数扩增;7)双端非特异指数扩增。本发明还公开了用于上述方法的试剂盒和基因甲基化检测方法的用途。本发明通过加长原始DNA模板减少DNA损失、线性放大补偿重亚硫酸盐处理造成的DNA损失、单分子标记去除非靶标DNA的竞争干扰,提高了甲基化测序的灵敏度和特异性。

    用于肝细胞癌症的微RNA表达谱分析的组合物和方法

    公开(公告)号:CN102985558B

    公开(公告)日:2015-08-19

    申请号:CN200980150551.3

    申请日:2009-11-13

    Applicant: 复旦大学

    CPC classification number: C12Q1/6886 C12Q2600/158 C12Q2600/178

    Abstract: 本发明涉及肝细胞癌症的微RNA(miRNA)表达谱分析的组合物和方法。特别地,本发明涉及用于鉴别显示肝细胞癌症或具有发生肝细胞癌症倾向的一或多种哺乳动物靶细胞的分子标记的诊断试剂盒,所述试剂盒包含多种核酸分子,每种核酸分子编码miRNA序列,其中所述多种核酸分子的一或多种在靶细胞中及在一或多种对照细胞中差异表达,且其中所述一或多种差异表达的核酸分子一起代表核酸表达特征,所述核酸表达特征是存在肝细胞癌症或倾向发生肝细胞癌症的指征。本发明进一步涉及使用这种核酸表达特征鉴别显示肝细胞癌症或具有发生肝细胞癌症倾向的一或多种哺乳动物靶细胞以及预防或治疗这种病症的相应方法。最后,本发明涉及预防和/或治疗肝细胞癌症的药物组合物。

    一种快速分离乳腺癌原代肿瘤活细胞方法

    公开(公告)号:CN104974985B

    公开(公告)日:2019-04-02

    申请号:CN201410146409.4

    申请日:2014-04-12

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于细胞分离技术领域,涉及高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离方法。本发明方法包括:获得离体的乳腺癌新鲜的组织样品,组织样品前处理和质控,高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离,批量快速分离高纯度乳腺癌原代肿瘤活细胞,本方法从乳腺癌组织块中分离活的乳腺癌细胞,肿瘤细胞纯度达90%以上。分离的乳腺癌原代肿瘤活细胞可用于药敏试验。本方法克服了现有技术原代乳腺癌细胞分离纯度低且极易受成纤维细胞污染等缺陷,能为临床药敏试验提供可靠的研究对象,为原代肿瘤细胞DNA、RNA和蛋白的建库以及为肿瘤在体研究提供新的方法和更广阔的材料来源。

    一种快速分离乳腺癌原代肿瘤活细胞方法

    公开(公告)号:CN104974985A

    公开(公告)日:2015-10-14

    申请号:CN201410146409.4

    申请日:2014-04-12

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于细胞分离技术领域,涉及高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离方法。本发明方法包括:获得离体的乳腺癌新鲜的组织样品,组织样品前处理和质控,高纯度批量乳腺癌原代肿瘤活细胞快速分离,批量快速分离高纯度乳腺癌原代肿瘤活细胞,本方法从乳腺癌组织块中分离活的乳腺癌细胞,肿瘤细胞纯度达90%以上。分离的乳腺癌原代肿瘤活细胞可用于药敏试验。本方法克服了现有技术原代乳腺癌细胞分离纯度低且极易受成纤维细胞污染等缺陷,能为临床药敏试验提供可靠的研究对象,为原代肿瘤细胞DNA、RNA和蛋白的建库以及为肿瘤在体研究提供新的方法和更广阔的材料来源。

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