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公开(公告)号：CN102690841A
公开(公告)日：2012-09-26
申请号：CN201210201529.0
申请日：2012-06-19
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种获得红豆杉转基因愈伤组织的遗传转化方法。本发明包括红豆杉胚性愈伤组织的诱导培养，带有GUS基因的植物高效表达载体转入根癌农杆菌，农杆菌遗传转化胚性愈伤，转化受体材料的继代增殖培养及抗性胚性愈伤组织的筛选，抗性胚性愈伤组织的继代增殖培养，PCR检测和GUS基因的检测等。本方法在红豆杉胚性愈伤组织中表达GUS基因，成功地得到红豆杉胚性愈伤组织遗传转化方法。本发明方法获得的红豆杉转基因愈伤组织可在红豆杉基因工程、细胞工程、代谢工程以及红豆杉遗传转化体系的建立中具有广泛应用。
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公开(公告)号：CN102690841B
公开(公告)日：2014-02-19
申请号：CN201210201529.0
申请日：2012-06-19
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种获得红豆杉转基因愈伤组织的遗传转化方法。本发明包括红豆杉胚性愈伤组织的诱导培养，带有GUS基因的植物高效表达载体转入根癌农杆菌，农杆菌遗传转化胚性愈伤，转化受体材料的继代增殖培养及抗性胚性愈伤组织的筛选，抗性胚性愈伤组织的继代增殖培养，PCR检测和GUS基因的检测等。本方法在红豆杉胚性愈伤组织中表达GUS基因，成功地得到红豆杉胚性愈伤组织遗传转化方法。本发明方法获得的红豆杉转基因愈伤组织可在红豆杉基因工程、细胞工程、代谢工程以及红豆杉遗传转化体系的建立中具有广泛应用。
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公开(公告)号：CN103773799B
公开(公告)日：2017-11-10
申请号：CN201410039375.9
申请日：2014-01-27
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种红豆杉愈伤转化过程中农杆菌侵染的方法。本发明把红豆杉下胚轴作为外植体诱导愈伤组织，并经过培养获得胚性愈伤；用根癌农杆菌介导，采用农杆菌浸润的刀片切割红豆杉愈伤组织，将带有GUS基因的pCAMBIA1304质粒导入红豆杉愈伤组织，PCR检测外源潮霉素磷酸转移酶基因(HPT)的整合情况，组织化学方法检测GUS基因在组织中的表达情况，获得红豆杉的转基因愈伤组织；其中，刀面接触在愈伤组织的切面上形成一定的菌液梯度，从而覆盖转化所需的最佳菌液浓度，确保细胞得到成功转化，提高农杆菌转化的成功率，为红豆杉愈伤组织开展高效地遗传转化工程奠定的基础。
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公开(公告)号：CN103773799A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410039375.9
申请日：2014-01-27
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种红豆杉愈伤转化过程中农杆菌侵染的方法。本发明把红豆杉下胚轴作为外植体诱导愈伤组织，并经过培养获得胚性愈伤；用根癌农杆菌介导，采用农杆菌浸润的刀片切割红豆杉愈伤组织，将带有GUS基因的pCAMBIA1304质粒导入红豆杉愈伤组织，PCR检测外源潮霉素磷酸转移酶基因(HPT)的整合情况，组织化学方法检测GUS基因在组织中的表达情况，获得红豆杉的转基因愈伤组织；其中，刀面接触在愈伤组织的切面上形成一定的菌液梯度，从而覆盖转化所需的最佳菌液浓度，确保细胞得到成功转化，提高农杆菌转化的成功率，为红豆杉愈伤组织开展高效地遗传转化工程奠定的基础。
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