公开(公告)号：CN107881230A

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201610876947.8

申请日：2016-09-30

Applicant: 复旦大学

Inventor： 刘赟 ,  邱文青

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6869

CPC classification number: C12Q1/6886 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q2600/118 ,  C12Q2600/156 ,  C12Q2563/159

Abstract: 本发明涉及生物技术领域及核酸检测领域，涉及检测肺癌血浆游离目标DNA多位点低频突变的方法及其试剂盒。本发明提供了高灵敏度和高通量的用于一次性检测肺癌血浆游离DNA多位点突变的方法及试剂盒。该检测方法结合ddPCR及二代测序技术对肺癌ctDNA突变进行检测，包括步骤：1)数字PCR混合液制备，包括待测样品DNA模板、引物及PCR预混液；2)制作数字PCR微反应液滴，进行PCR扩增反应；3)PCR产物的回收与纯化；4)二轮PCR混合液制备及扩增；5)PCR产物纯化及文库质控，6.上机测序及数据分析；可一次性检测肺癌EGFR/BRAF/KRAS/PIK3A/MET2/ERBB2/AKT1/NRAS/TP53/PTEN共10个基因的热点突变信息，能显著节约样本，实现高灵敏、高通量的检测肺癌ctDNA突变信息。