公开(公告)号：CN102199606A

公开(公告)日：2011-09-28

申请号：CN201110055296.3

申请日：2011-03-09

Applicant: 塔里木大学

Inventor： 高庆华 ,  孙献莹 ,  韩春梅

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种筛选哺乳动物XY精子差异表达基因的方法，包括下列步骤：流式细胞仪分选X、Y精子；分离纯化X、Y精子mRNA；通过Y精子对X精子扣除杂交获得Y精子对X精子差异表达的mRNA；通过X精子对Y精子扣除杂交获得X精子对Y精子差异表达的mRNA；将得到的差异表达的mRNA采用Super SMART技术扩增，构建Y-X扣除杂交cDNA质粒库，克隆，测序，生物信息学分析。采用该方法得到的mRNA纯度高、完整且浓度高体积小，又是层析柱式的逐级淋洗使cDNA与mRNA吸附得更充分，而且层析柱上的对照cDNA可以反复多次用于扣除杂交反应，同时，操作简单、灵敏、试验时间短、无污染。

公开(公告)号：CN102199606B

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201110055296.3

申请日：2011-03-09

Applicant: 塔里木大学

Inventor： 高庆华 ,  孙献莹 ,  韩春梅

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种筛选哺乳动物XY精子差异表达基因的方法，包括下列步骤：流式细胞仪分选X、Y精子；分离纯化X、Y精子mRNA；通过Y精子对X精子扣除杂交获得Y精子对X精子差异表达的mRNA；通过X精子对Y精子扣除杂交获得X精子对Y精子差异表达的mRNA；将得到的差异表达的mRNA采用Super SMART技术扩增，构建Y-X扣除杂交cDNA质粒库，克隆，测序，生物信息学分析。采用该方法得到的mRNA纯度高、完整且浓度高体积小，又是层析柱式的逐级淋洗使cDNA与mRNA吸附得更充分，而且层析柱上的对照cDNA可以反复多次用于扣除杂交反应，同时，操作简单、灵敏、试验时间短、无污染。