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公开(公告)号:CN104109687A
公开(公告)日:2014-10-22
申请号:CN201410332921.8
申请日:2014-07-14
Applicant: 四川大学
Abstract: 构建CRISPR-Cas系统表达质粒pSUZM1a-Cas9,pSUZM2a-Cas9,pSUZM3a-Cas9,包含运动发酵单胞菌内源性基因启动子、筛选标记基因和CRISPR系统的Cas9基因。构建表达质粒pUC-T7sgRNA,含复制起点、筛选标记基因、T7基因启动子和终止子、BbsI识别序列和crRNA-tracrRNA序列。设计相应的靶序列,DNA模板经T7RNA聚合酶体外转录,经纯化后获得的sgRNA与Cas9基因表达质粒共电转化大肠杆菌和Z.mobilisZM4。结果表明,利用CRISPR技术能够成功敲除大肠杆菌DH5α的upp基因、有效地消除运动单胞菌中的天然质粒。在研究过程中所建立的Cas9基因表达质粒、sgRNA表达质粒以及成套研究方法可以广泛地用于运动发酵单胞菌基因组中基因的敲除,具有很好的市场应用前景。
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公开(公告)号:CN100374558C
公开(公告)日:2008-03-12
申请号:CN03135279.0
申请日:2003-06-24
Applicant: 四川大学 , 绵阳华威基因工程有限公司
Abstract: 本发明涉及一种芽孢杆菌属的短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)菌株(保藏号:CGMCCNO.0518),通过培养所说的菌株或其突变体所获得的脱毛蛋白酶、编码这种脱毛蛋白酶的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种脱毛蛋白酶的方法。本发明还公开了此酶的用途,以及编码这种酶的多核苷酸的用途。
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公开(公告)号:CN101113158A
公开(公告)日:2008-01-30
申请号:CN200610022519.5
申请日:2006-12-18
Applicant: 四川大学
Abstract: 本发明公开了两种抗SARS病毒的siRNA及其应用。本发明的抗SARS病毒的siRNA的作用效果显著,且可以通过构建siRNA表达盒获得,克服了化学合成siRNA价格昂贵等问题,将在SARS病毒的防治中起到重要作用。
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公开(公告)号:CN1361278A
公开(公告)日:2002-07-31
申请号:CN00120641.9
申请日:2000-12-29
Applicant: 四川大学
Abstract: 本发明涉及一种新的芽孢杆菌属未知菌株(保藏号CGMCC NO.0518),通过培养所说的菌株或其突变体所获得的、具有下列特性的蛋白酶、此蛋白酶的产生方法及其用途。该酶能水解蛋白质和肽;在50℃下,在pH9.6时的酶活最高;在50℃下,pH6-pH11范围内酶活力稳定;最适反应温度50℃;分子量为40,000道尔顿。本发明的蛋白酶可以对猪皮、羊皮、牛皮具有非常好的脱毛效果,且不损伤皮胶原;也可用于制革中的浸水工艺和软化工艺。
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公开(公告)号:CN104212829A
公开(公告)日:2014-12-17
申请号:CN201410301875.5
申请日:2014-06-30
Applicant: 四川大学
Abstract: 本发明公开了一类表达载体pSUZM1a、pSUZM1b、pSUZM1c;pSUZM2a、pSUZM2b、pSUZM2c和pSUZM3a、pSUZM3b、pSUZM3c及其构建方法。所述的表达载体是一类环状载体,这些载体都包含来自于质粒pUC18上的大肠杆菌质粒复制起点和卡那霉素筛选标记基因。其中pSUZM1(a,b,c)还包含来自于运动发酵单胞菌染色体上复制起点oriC、pSUZM2(a,b,c)包含来自于运动发酵单胞菌内源性质粒pZZM401的复制起点、pSUZM3(a,b,c)包含来自于运动发酵内源性质粒pZZM402上的复制起点。pSUZM1a、pSUZM2a、pSUZM3a包含来自于运动发酵单胞菌的启动子Ppdc;pSUZM1b、pSUZM2b、pSUZM3b包含来自于载体pKD46的启动子Para;pSUZM1c、pSUZM2c、pSUZM3c包含来自于载体pGEX的tac启动子。通过本发明的方法,实现了外源基因的在运动发酵单胞菌中的高效表达,具有很好的应用前景。
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公开(公告)号:CN104152482A
公开(公告)日:2014-11-19
申请号:CN201410332018.1
申请日:2014-07-14
Applicant: 四川大学
IPC: C12N15/74
Abstract: 本发明公开了6个用于运动发酵单胞菌的RecET重组系统表达质粒pSUZM1a-RecET(RecE588T)、pSUZM2a-RecET(RecE588T)、pSUZM3a-RecET(RecE588T)及其构建方法与应用。这6个表达质粒都包含卡那霉素筛选标记基因、组成型启动子Ppdc和RecET(或RecE588T)基因。其区别在于质粒pSUZM1a-RecET(RecE588T)包含运动发酵单胞菌染色体上复制起点oriC、质粒pSUZM2a-RecET(RecE588T)包含运动发酵单胞菌内源性质粒pZZM401上的复制蛋白序列、质粒pSUZM3a-RecET(RecE588T)包含运动发酵单胞菌内源性质粒pZZM402上的复制蛋白序列。把表达质粒转入Z. mobilis,在敲入的筛选标记基因同源臂为60bp时,敲入基因能够准确地替换靶基因。本发明的质粒具有很好的应用前景。
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公开(公告)号:CN104031932A
公开(公告)日:2014-09-10
申请号:CN201410296217.1
申请日:2014-06-27
Applicant: 四川大学
Abstract: 本发明公开了一类运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体pSUZM1、pSUZM2和pSUZM3及其构建方法。所述的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体是一类环状载体,pSUZM1包含来自于运动发酵单胞菌染色体上复制起点oriC、来自于质粒pUC18上的大肠杆菌质粒复制起点,卡那霉素筛选标记基因;pSUZM2包含来自于运动发酵单胞菌内源性质粒pZZM401的复制起点、DNA复制蛋白基因序列和来自于质粒pUC18上的大肠杆菌质粒复制起点、卡那霉素筛选标记基因;pSUZM3包含来自于运动发酵内源性质粒pZZM402上的复制起点、DNA复制蛋白基因序列和来自于质粒pUC18上的大肠杆菌质粒复制起点、卡那霉素筛选标记基因。本发明的穿梭载体既能在大肠杆菌中复制,又能在运动发酵单胞菌中复制,并且在运动发酵单胞菌中能够稳定的遗传,具有很好的应用前景。
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公开(公告)号:CN1303210C
公开(公告)日:2007-03-07
申请号:CN00120641.9
申请日:2000-12-29
Applicant: 四川大学
Abstract: 本发明涉及一种来源于短小芽孢杆菌菌株(Bacillus pumilus)CGMCC NO.0518的蛋白酶。该酶能水解蛋白质和肽;在50℃下,在pH 9.6时的酶活最高;在50℃下,pH 6-11范围内酶活力稳定;最适反应温度50℃;分子量为40,000道尔顿。本发明的蛋白酶可以对猪皮、羊皮、牛皮具有非常好的脱毛效果,且不损伤皮胶原;也可用于制革中的浸水工艺和软化工艺。
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公开(公告)号:CN1569871A
公开(公告)日:2005-01-26
申请号:CN03135462.9
申请日:2003-07-23
Applicant: 四川大学 , 绵阳华威基因工程有限公司
Abstract: 本发明涉及一种用作在细菌中表达外源基因的启动子核苷酸序列。本发明还涉及含有该核苷酸序列的载体和宿主细胞。来自于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌株(保藏号:CGMCC NO.0518)的启动子Bp53被用于在细菌中高水平地表达导入的基因。启动子Bp53片段长184碱基对。
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公开(公告)号:CN1478890A
公开(公告)日:2004-03-03
申请号:CN02133669.5
申请日:2002-08-28
Applicant: 四川大学 , 四川川大华威基因工程有限公司
Abstract: 本发明涉及一种新的芽孢杆菌属未知菌株(保藏号CGMCC NO.0625),通过培养所说的菌株或其突变体所获得的豆豉溶栓酶、编码这种豆豉溶栓酶的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种豆豉溶栓酶的方法。本发明还公开了此酶的用途,以及编码这种酶的多核苷酸的用途。
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