公开(公告)号：CN108088997B

公开(公告)日：2020-03-17

申请号：CN201611049238.9

申请日：2016-11-21

Applicant: 同济大学 ,  上海捷易生物科技有限公司

Inventor： 高绍荣 ,  王译萱 ,  张勇 ,  杨媛媛 ,  赵程辰 ,  侯真真 ,  毕焱 ,  陈珺

IPC: G01N33/573

Abstract: 本发明涉及一种利用细胞表面分子ALPPL2鉴定人类态多能性的方法。步骤是：建立可诱导的2代重编程系统，利用特定的诱导培养体系从人的成纤维细胞中分别建立态及primed态iPSC系；分别提取所建立的态及primed态iPSCs中的细胞膜蛋白，通过iTRAQ标记及蛋白质谱定量技术，对两者的膜蛋白进行系统比较分析，筛选出相比于primed iPSCs，中高表达的膜蛋白库；3.在及primed重编程过程中分别选取特定时间节点进行细胞收样，结合RNAseq分析，获得及primed重编程过程转录组的动态变化，并将在重编程过程中特异性上调的基因与步骤2中筛选出的膜蛋白库进行综合比较。本发明找到了可特异指征人的态多能性的表面分子标志物ALPPL2。

公开(公告)号：CN108088997A

公开(公告)日：2018-05-29

申请号：CN201611049238.9

申请日：2016-11-21

Applicant: 同济大学 ,  上海捷易生物科技有限公司

Inventor： 高绍荣 ,  王译萱 ,  张勇 ,  杨媛媛 ,  赵程辰 ,  侯真真 ,  毕焱 ,  陈珺

IPC: G01N33/573

Abstract: 本发明涉及一种利用细胞表面分子ALPPL2鉴定人类 态多能性的方法。步骤是：建立可诱导的2代重编程系统，利用特定的诱导培养体系从人的成纤维细胞中分别建立态及primed态iPSC系；分别提取所建立的 态及primed态iPSCs中的细胞膜蛋白，通过iTRAQ标记及蛋白质谱定量技术，对两者的膜蛋白进行系统比较分析，筛选出相比于primed iPSCs， 中高表达的膜蛋白库；3.在及primed重编程过程中分别选取特定时间节点进行细胞收样，结合RNAseq分析，获得 及primed重编程过程转录组的动态变化，并将在 重编程过程中特异性上调的基因与步骤2中筛选出的膜蛋白库进行综合比较。本发明找到了可特异指征人的 态多能性的表面分子标志物ALPPL2。

公开(公告)号：CN105463089A

公开(公告)日：2016-04-06

申请号：CN201510966989.6

申请日：2015-12-21

Applicant: 同济大学

Inventor： 刘桂芬 ,  张勇 ,  王璐莹 ,  霍霄 ,  赵程辰 ,  王文

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12Q1/6888 ,  C12N15/1003 ,  C12N2330/31 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明涉及一种应用于斑马鱼胚胎的易接近转座酶核染色质高通量测序实验(ATAC-seq)的方法，首先进行斑马鱼胚胎样本前处理，然后在胚胎中加入裂解缓冲液，用广口枪头在冰浴中裂解胚胎，立即进行转座反应并纯化DNA，然后通过实时荧光定量的方法确定建库用的循环数，直接通过一步PCR的方法进行建库测序。ATAC-seq和DNase-seq两种方法都能够对基因组染色质上调控序列进行定位和解读，但ATAC-seq步骤更为简单，需要的细胞也更少，在无法获得大量细胞的情况下，ATAC-seq更有帮助，且根据实验结果ATAC-seq获得的数据富集程度更高。本发明还将其应用到斑马鱼胚胎细胞中，对于研究生物体早期发育过程中的染色质结构的变化及相应的基因表达调控研究提供一种有效且简单的方法。