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公开(公告)号：CN111909908A
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN202010794083.1
申请日：2020-08-10
Applicant: 吉林大学
IPC: C12N9/08 , C12N9/96 , A23L33/17 , A61K47/60 , A61K38/44 , A61P39/06 , A61K8/66 , A61K8/86 , A61Q19/06
Abstract: 一种聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体、制备方法及聚乙二醇化单修饰前后的重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体在制备抗氧化药物、化妆品和保健品方面的应用，属于生物技术领域。本发明以重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体作为待修饰蛋白，以活化的直链单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯作为修饰剂，通过共价偶联得到聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体，其分子量约为重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的2倍，这有利于降低肾清除率，延长体内循环半衰期。修饰后表现出的较长半衰期、增强的药效以及较强的抗氧化活性，极大地拓宽了重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的应用范围。
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公开(公告)号：CN108893454A
公开(公告)日：2018-11-27
申请号：CN201810823075.8
申请日：2018-07-25
Applicant: 吉林大学
Abstract: 一种聚乙二醇修饰的重组谷胱甘肽过氧化物酶GPx1突变体、制备方法及重组谷胱甘肽过氧化物酶GPx1突变体用聚乙二醇修饰前后在抗氧化方面的应用，属于生物技术领域。是采用活化的直链状单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丁酸酯作为修饰剂，与重组谷胱甘肽过氧化物酶GPx1突变体在4～37℃、pH＝6.0～9.0条件下反应10～60min，加入终止剂甘氨酸终止反应，透析去除副产物，得到突变体；其中，重组谷胱甘肽过氧化物酶GPx1突变体与活化的直链状单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丁酸酯的用量质量比为1：10～120。经测定其氨基修饰率最高可达98.73％，当氨基修饰率达40％以上时，进入体内后就可完全消除异体蛋白的抗原抗体反应，因此本发明产物具有消除酶蛋白抗原抗体反应的特性。
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公开(公告)号：CN103756984A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410054696.6
申请日：2014-02-18
Applicant: 吉林大学
CPC classification number: C12N9/0065 , C12N15/70 , C12N15/85 , C12Y111/01009
Abstract: 高活力谷胱甘肽过氧化物酶GPX2突变体及其制备方法，属于生物技术领域。本发明以人GPX2为模板，通过计算机模拟和定点突变，得到一种新型的高活力谷胱甘肽过氧化物酶GPX2突变体，其由203个氨基酸组成，与人GPX2相比较，其不含有半胱氨酸，具有较高的GPX活力和更好的稳定性，其是将人GPX2中所有半胱氨酸突变成丝氨酸，但第40位仍然是硒代半胱氨酸（SeCys）。其是用基因工程技术在哺乳动物细胞株或营养缺陷型原核表达系统及其SPP低温表达系统中直接表达具有高酶活性的GPX2突变体蛋白的方法。本方法不需化学修饰即可制备具有极高GPX活力的新型人工酶。本发明方法在生物制药方面具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN107177561A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710583460.5
申请日：2017-07-18
Applicant: 吉林大学
Abstract: 一种兼具谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的双功能抗氧化酶及其制备方法，属于生物技术领域。涉及序列SEQ ID No:1～26，其由GPX和SOD两种酶的氨基酸序列组成，既能分解SOD的底物，又能分解GPX的底物。先用基因合成法获得杂合tRNA基因，再合成或扩增GPX和SOD基因，将两者组装到同一个能够表达杂合tRNA的分泌型原核表达载体上，转化TAG工程菌，在亚硒酸钠存在下诱导表达，通过常规氨基酸进入肽链的方式将GPX的催化基团Sec引入到蛋白的底物结合部位，赋予其高的GPX和SOD活性。本发明方法简单，酶蛋白活力和产量高、稳定性好，具有高效的抗氧化功能。
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公开(公告)号：CN103898074B
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201410138374.X
申请日：2013-07-18
Applicant: 吉林大学
Abstract: 一种含有两个以上催化基团的谷胱甘肽过氧化物酶GPX1突变体及其制备方法，属于生物技术领域。先用基因突变或合成法获得突变体基因，再通过营养缺陷型原核表达系统或营养缺陷型和SPP低温联合表达系统，将两个或多个GPX的催化基团SeCys引入到突变体的底物结合部位，结果赋予其高的GPX活性；或者先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上，再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上，将两种载体共转染同一哺乳细胞株，在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单，突变体活力和产量高、稳定性好，避免包涵体复性造成的产率下降和失活，从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103898073B
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201410136649.6
申请日：2013-07-18
Applicant: 吉林大学
Abstract: 一种含有更多丝氨酸的谷胱甘肽过氧化物酶GPX1突变体及其制备方法，属于生物技术领域。先用基因突变或合成法获得突变体基因，再通过营养缺陷型原核表达系统或营养缺陷型和SPP低温联合表达系统，将GPX的催化基团SeCys引入到突变体的底物结合部位，结果赋予其高的GPX的活性；或者先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上，再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上，将两种载体共转染同一哺乳细胞株，在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单，突变体活力和产量高、稳定性好，避免包涵体复性造成的产率下降和失活，从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。
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公开(公告)号：CN103224915A
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201310142866.1
申请日：2013-04-24
Applicant: 吉林大学
Abstract: 本发明的基因工程法制备重组谷胱甘肽过氧化物酶属于生物技术的领域。先将靶基因组装到分泌型原核表达载体上，用基因突变法通过营养缺陷型原核表达系统或营养缺陷型和SPP低温联合表达系统，将GPX的催化基团SeCys引入到GPX的底物结合部位，结果赋予其高的GPX的活性；或者先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上，再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上，将两种载体共转染同一哺乳细胞株，在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单，重组GPX活力和产量高、稳定性好，避免包涵体复性造成的产率下降和失活，从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。
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公开(公告)号：CN101280015B
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN200810050556.6
申请日：2008-04-01
Applicant: 吉林大学
Abstract: 本发明的可溶性人源含硒单链抗体酶的制备方法属于生物技术领域。以谷胱甘肽衍生物为靶抗原，通过免疫亲和筛选法对重组噬菌体展示人单链抗体库进行筛选，得到单链抗体B3和D8。将单链抗体基因组装到分泌型原核或真核表达载体上，转化大肠杆菌或酵母细胞，在原核或真核中表达并纯化单链抗体蛋白；用化学突变法在抗体的底物结合部位引入GPX的催化基团SeCys。或用基因突变技术和营养缺陷型大肠杆菌直接表达在底物结合部位含有GPX催化基团的可溶性单链抗体蛋白，赋予抗体以GPX的催化活性。本发明的制备方法简单；制备的人源含硒单链抗体酶活力高；所表达的蛋白为可溶性；有利于大规模生产，在生物制药方面有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN119492873A
公开(公告)日：2025-02-21
申请号：CN202411440990.0
申请日：2024-10-16
Applicant: 吉林大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/543 , G01N33/531 , G01N33/58
Abstract: 本发明属于生物技术领域，本发明提供一种基于生物偶联策略的细胞表面待测细胞因子富集系统及方法，实现在细胞表面富集待测细胞因子且保证捕获和检测探针稳定构筑于细胞膜上而不被内化，依靠生物素和链霉亲和素高效结合力的细胞膜表面生物偶联策略，采用带负电磺基的Sulfo‑NHS‑LC‑Biotin使细胞膜渗透性减弱，实现细胞膜蛋白有效生物素化，将带有链霉亲和素的捕获探针和检测探针与生物素化细胞膜蛋白结合，确保探针稳定构筑在细胞膜上，避免被内化，并通过捕获探针特异性结合细胞表面待测细胞因子实现富集，该发明提高了细胞表面待测细胞因子富集的准确性和可靠性，操作简单，为细胞生物学研究和临床诊断提供有力工具。
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公开(公告)号：CN104651329A
公开(公告)日：2015-05-27
申请号：CN201510069319.4
申请日：2014-02-18
Applicant: 吉林大学
IPC: C12N9/08
CPC classification number: C12N9/0065 , C12Y111/01009
Abstract: 一种含有丝氨酸的谷胱甘肽过氧化物酶GPX2突变体及其制备方法，属于生物技术领域。本发明以人GPX2为模板，通过计算机模拟和定点突变，得到一种新型的高活力谷胱甘肽过氧化物酶GPX2突变体，其由203个氨基酸组成，与人GPX2相比较，其不含有半胱氨酸，具有较高的GPX活力和更好的稳定性，其是将人GPX2中所有半胱氨酸突变成丝氨酸，但第40位仍然是硒代半胱氨酸(SeCys)；117位丙氨酸(Ala)突变为丝氨酸(Ser)，所形成的序列为SEQ ID No:2。其是用基因工程技术在哺乳动物细胞株或营养缺陷型原核表达系统及其SPP低温表达系统中直接表达具有高酶活性的GPX2突变体蛋白的方法。本方法不需化学修饰即可制备具有极高GPX活力的新型人工酶。本发明方法在生物制药方面具有广阔的应用前景。
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