公开(公告)号：CN109536521A

公开(公告)日：2019-03-29

申请号：CN201811415132.5

申请日：2018-11-26

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 姜延龙 ,  王春凤 ,  杨桂连 ,  高兴 ,  许可

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  A61K48/00 ,  A61K39/17 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供一种微环DNA及其制备方法与应用,该微环DNA含有编码EGFP绿色荧光蛋白报告基因。制备方法包括：在CMV-EGFP-polyA阅读框两侧分别引入lox66及lox71位点；用SacII和StuI双酶切扩增产物一，连接后，转化大肠杆菌Top10感受态细胞；将pYL19完整质粒进行PCR扩增，并引入XmaI和PacI酶切位点；将PGK-cre-polyA质粒进行PCR扩增，并引入XmaI和PacI酶切位点；用XmaI和PacI双酶切扩增产物二和扩增产物三，连接后，转化大肠杆菌Top10感受态细胞；对pYL46完整质粒提取重组质粒，然后瞬时转染至培养状态良好的人胚肾HEK-293 T细胞。