公开(公告)号：CN108410901A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810148987.X

申请日：2018-02-13

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王春凤 ,  刘琼 ,  姜延龙

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了无抗性植物乳杆菌锚定表达载体pLQ2a，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；它是生物安全外源蛋白表达系统，以asd缺失株E.coli 6212/Δasd和alr缺失L.plantarum NC8/Δalr为宿主菌，将来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp. cremoris strain JM4）基因组上P23启动子作为alr基因表达的启动子，以pYA4545，pYA4545-Mcherry，pLP-1261 Inv，pSIP409PgsA’，pSIP409PgsA’-IL-10，pSIP409PgsA’-EGFP为基础载体，构建以PgsA’和LP-1261为双锚定模型的营养互补筛选标记大肠杆菌-乳酸菌无抗锚定表达载体pLQ2a，并以EGFP及Mcherry作为报告基因进行筛选及锚定表达验证；解决了植物乳杆菌连接转化效率低，很难筛选到阳性重组子的问题，构建表达载体pLQ2既能在E.coli 6212/Δalr中复制表达，又能在L.plantarum NC8/Δalr中表达。

公开(公告)号：CN108410900A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810148983.1

申请日：2018-02-13

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王春凤 ,  刘琼 ,  姜延龙 ,  刘永仕 ,  杨桂连 ,  刘晶

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了无抗性植物乳杆菌锚定表达载体pLPSa，它是生物安全外源蛋白表达系统，以asd缺失株E.coli 6212/Δasd和alr缺失L. plantarum NC8/Δalr为宿主菌，将来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp. cremoris strain JM4）基因组上P23启动子作为alr基因表达的启动子，以pYA4545，pLP-1261 Inv，pSIP409PgsA’-IL-10，pSIP409PgsA’-EGFP为基础载体，构建以表面蛋白（S_achoring）为锚定模型的营养互补筛选标记大肠杆菌-乳酸菌无抗锚定表达载体pLPSa，并以EGFP作为报告基因进行筛选及锚定表达验证。

公开(公告)号：CN106520803A

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201610128953.5

申请日：2016-03-08

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王春凤 ,  姜延龙 ,  刘琼 ,  蔡若鹏 ,  杨桂连

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  C12R1/25 ,  C12R1/23

CPC classification number: C12N15/74 ,  C07K2319/03 ,  C07K2319/43 ,  C12N9/93 ,  C12Y603/02

Abstract: 本发明公开了一种融合基因pgsA，-mRck-FLAG，其中mRck-FLAG来源于鼠伤寒沙门氏菌χ3761，将pgsA，-mRck-FLAG插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒载体 pW425et中，获得了侵入型乳酸重组质粒pW425et-pgsA，-mRck-FLAG，将其转染至嗜酸乳杆菌中，获得了一种侵入型乳酸菌，侵入性实验表明，一种侵入型乳酸菌成功地侵入了RAW细胞，为今后以重组的侵入型乳酸菌作为口服DNA疫苗的细胞载体奠定基础。

公开(公告)号：CN105734072A

公开(公告)日：2016-07-06

申请号：CN201610128954.X

申请日：2016-03-08

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王春凤 ,  姜延龙 ,  杨桂连 ,  刘琼 ,  蔡若鹏

IPC: C12N15/61 ,  C12N15/10 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N15/65 ,  C12R1/25

CPC classification number: C12N9/90 ,  C12N15/10 ,  C12N15/65 ,  C12N15/75 ,  C12N2800/101 ,  C12Y501/01001

Abstract: 本发明公开了一种alr缺陷植物乳杆菌NC8及alr标记表达载体pCJ2，alr缺陷植物乳杆菌NC8是将alr缺失自杀性质粒pNZ5319?Δalr转染植物乳杆菌NC8后，获得了缺失alr基因的植物乳杆菌NC8，同时构建了alr标记表达载体pCJ2，是食品级乳酸菌表达系统，安全可靠。

公开(公告)号：CN108410900B

公开(公告)日：2020-07-14

申请号：CN201810148983.1

申请日：2018-02-13

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王春凤 ,  刘琼 ,  姜延龙 ,  刘永仕 ,  杨桂连 ,  刘晶

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了无抗性植物乳杆菌锚定表达载体pLPSa，它是生物安全外源蛋白表达系统，以asd缺失株E.coli 6212/Δasd和alr缺失L.plantarum NC8/Δalr为宿主菌，将来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp.cremoris strain JM4）基因组上P23启动子作为alr基因表达的启动子，以pYA4545，pLP‑1261 Inv，pSIP409PgsA’‑IL‑10，pSIP409PgsA’‑EGFP为基础载体，构建以表面蛋白（S_achoring）为锚定模型的营养互补筛选标记大肠杆菌‑乳酸菌无抗锚定表达载体pLPSa，并以EGFP作为报告基因进行筛选及锚定表达验证。

公开(公告)号：CN108410901B

公开(公告)日：2020-06-30

申请号：CN201810148987.X

申请日：2018-02-13

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 王春凤 ,  刘琼 ,  姜延龙

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了无抗性植物乳杆菌锚定表达载体pLQ2a，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；它是生物安全外源蛋白表达系统，以asd缺失株E.coli 6212/Δasd和alr缺失L.plantarum NC8/Δalr为宿主菌，将来源于乳酸乳球菌（Lactococcus lactis subsp.cremoris strain JM4）基因组上P23启动子作为alr基因表达的启动子，以pYA4545，pYA4545‑Mcherry，pLP‑1261 Inv，pSIP409PgsA’，pSIP409PgsA’‑IL‑10，pSIP409PgsA’‑EGFP为基础载体，构建以PgsA’和LP‑1261为双锚定模型的营养互补筛选标记大肠杆菌‑乳酸菌无抗锚定表达载体pLQ2a，并以EGFP及Mcherry作为报告基因进行筛选及锚定表达验证；解决了植物乳杆菌连接转化效率低，很难筛选到阳性重组子的问题，构建表达载体pLQ2既能在E.coli 6212/Δalr中复制表达，又能在L.plantarum NC8/Δalr中表达。