公开(公告)号：CN104131018A

公开(公告)日：2014-11-05

申请号：CN201410373158.3

申请日：2014-07-31

Applicant: 厦门大学

Inventor： 方柏山 ,  黄世阳 ,  彭江海 ,  王兆守

IPC: C12N15/63

Abstract: 一种细胞内蛋白自诱导表达的方法，涉及基因工程领域。将费氏弧菌(Vibrio fischeri)群体感应相应的启动子和结构基因克隆到质粒里，构建了一个自诱导的基因通路，该通路为：lux pR-RBS-luxI-TT-lux pL-RBS-luxR-TT-lux pR，它不依赖诱导物就能通过通路本身的正反馈实现后续的目的蛋白在较高的菌体浓度下自动地大量诱导表达，实现了细胞生长期与产物表达时间的分开，进而提高了产物产率。由于不用添加诱导物，节约了成本和简化操作过程，另一方面还可以通过特殊的启动子设计，使通路在检测重金属离子、农业污染菌、检测环境变化等方面具备应用前景。

公开(公告)号：CN116926060A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202310652836.9

申请日：2023-06-02

Applicant: 厦门大学

Inventor： 方柏山 ,  林建文 ,  黄世阳

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N9/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种蛋白质定向进化的方法，包括：1)构建筛选质粒，所述筛选质粒的结构为luxpR启动子1‑核糖体结合位点‑luxR‑终止子‑luxpR蛋白基因‑核糖体结合位点‑细菌裂解蛋白基因lysis‑终止子‑luxpR启动子2‑核糖体结合位点‑目的蛋白基因‑终止子；2)采用易错PCR扩增目的蛋白基因得易错PCR产物；3)通过酶连反应将筛选质粒和易错PCR的产物连接，构建重组质粒；4)将重组质粒转化感受态细胞，涂布至含有目的蛋白基因的底物和抗生素的平板上，培养一段时间，筛选出含目的蛋白基因的突变株；5)对筛选出的含目的蛋白基因的突变株表达的突变蛋白进行测序，获得突变蛋白的序列。本发明的方法极大程度减少了蛋白质筛选工作时间和工作量。