公开(公告)号：CN106995823A

公开(公告)日：2017-08-01

申请号：CN201710239770.5

申请日：2017-04-13

Applicant: 厦门大学

Inventor： 左正宏 ,  周懿翕 ,  沈超 ,  王重刚

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K67/0278 ,  A01K2217/203 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0393 ,  C12N2800/60

Abstract: 一种转基因黑点青鳉的制备方法，涉及基因工程。CYP1A启动子序列的改造；Tol2转座子系统敲入质粒的构建和显微注射样品的制备；黑点青鳉胚胎的显微注射技术和继代培养。用TCDD作为标准物质，探究转基因黑点青鳉在TCDD刺激下绿色荧光蛋白的表达情况。提供一种含有12个DRE的CYP1A启动子的构建方法，以及含有该启动子连接绿色荧光蛋白基因的重组Tol2转座子敲入质粒，质粒线性化纯化的方法和显微注射样品的配方。通过显微注射技术制备得到的Tg(pCYP1A‑6×DRE‑EGFP)和Tg(pCYP1A‑12×DRE‑EGFP)转基因黑点青鳉，对比了含有6个DRE与12个DRE启动子的活性。

公开(公告)号：CN107058386A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201710240061.9

申请日：2017-04-13

Applicant: 厦门大学

Inventor： 左正宏 ,  沈超 ,  周懿翕 ,  王重刚

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K67/0278 ,  A01K2217/203 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0393 ,  C12N2800/60

Abstract: 一种转基因斑马鱼的制备方法，涉及基因工程。1)CYP1A启动子序列的改造；2)Tol2转座子系统敲入质粒的构建和显微注射样品的制备；3)斑马鱼胚胎的显微注射和继代培养。提供一种含有12个DRE的CYP1A启动子的构建方法，以及含有该启动子连接绿色荧光蛋白基因的重组Tol2转座子敲入质粒，质粒线性化纯化的方法和显微注射样品的配方。通过显微注射技术制备得到的Tg(pCYP1A‑6×DRE‑EGFP)和Tg(pCYP1A‑12×DRE‑EGFP)转基因斑马鱼，对比了含有6个DRE与12个DRE启动子的活性。

公开(公告)号：CN102495214B

公开(公告)日：2014-06-11

申请号：CN201110390727.1

申请日：2011-11-30

Applicant: 厦门大学

Inventor： 左正宏 ,  蔡嘉力 ,  王重刚 ,  李博文 ,  陈奕欣

IPC: G01N33/68 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/06

Abstract: 鞘脂激活蛋白原作为效应标志物在检测多氯联苯雄性生殖毒性的应用，涉及鞘脂激活蛋白原。鞘脂激活蛋白原是多功能的糖蛋白，分子量为70kD，存在于一些生物体液中。鞘脂激活蛋白原的筛选方法：用不同剂量的多氯联苯对小鼠进行暴露后收集样本；样本差异表达基因的筛选；对筛选的差异表达基因进行功能聚类，获得与生殖功能相关的差异表达基因；利用实时荧光定量PCR技术和免疫印迹法在mRNA转录水平和蛋白表达水平上对获得的差异表达基因随着PCB暴露剂量以及暴露时间的增加而变化进行检测分析；进行精子参数的检测分析；对效应标志物、体内多氯联苯水平以及精液指标之间的相关系数通过斯皮尔曼相关分析进行统计。

公开(公告)号：CN102495214A

公开(公告)日：2012-06-13

申请号：CN201110390727.1

申请日：2011-11-30

Applicant: 厦门大学

Inventor： 左正宏 ,  蔡嘉力 ,  王重刚 ,  李博文 ,  陈奕欣

IPC: G01N33/68 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/06

Abstract: 鞘脂激活蛋白原作为效应标志物在检测多氯联苯雄性生殖毒性的应用，涉及鞘脂激活蛋白原。鞘脂激活蛋白原是多功能的糖蛋白，分子量为70kD，存在于一些生物体液中。鞘脂激活蛋白原的筛选方法：用不同剂量的多氯联苯对小鼠进行暴露后收集样本；样本差异表达基因的筛选；对筛选的差异表达基因进行功能聚类，获得与生殖功能相关的差异表达基因；利用实时荧光定量PCR技术和免疫印迹法在mRNA转录水平和蛋白表达水平上对获得的差异表达基因随着PCB暴露剂量以及暴露时间的增加而变化进行检测分析；进行精子参数的检测分析；对效应标志物、体内多氯联苯水平以及精液指标之间的相关系数通过斯皮尔曼相关分析进行统计。

公开(公告)号：CN1661097A

公开(公告)日：2005-08-31

申请号：CN200410082383.8

申请日：2004-12-31

Applicant: 厦门大学 ,  集美大学

Inventor： 左正宏 ,  陈奕欣 ,  李博文 ,  王重刚 ,  陈骁 ,  赵扬 ,  陈昌生

IPC: C12Q1/68

Abstract: 用于鉴定坛紫菜优良品系的分子标记及其应用，涉及一种SCAR标记技术及其应用。利用AFLP标记技术，对坛紫菜优良品系等进行分析，找到优良品系特异的AFLP标记，并将其转换成SCAR标记，用SCAR标记设计特异引物Marker1和Marker2，并将特异引物做成用于鉴定坛紫菜优良品系的检测试剂盒，通过特异引物PCR扩增对个体进行鉴定，从养殖对象或野生坛紫菜种质资源库中筛选出优良品系，缩短育苗周期，提高选育准确性。广泛用于品系纯度与品系鉴别和分子标记辅助育种。为种质鉴定奠定基础，为坛紫菜遗传多样性、基因定位和快速构建遗传图谱及分子标记辅助育种等研究提供参考数据。检测试剂盒使用方便，重复性好，可靠性高，检测费用低，省时省力。

公开(公告)号：CN104450751A

公开(公告)日：2015-03-25

申请号：CN201410815726.0

申请日：2014-12-24

Applicant: 厦门大学

Inventor： 陈荣 ,  李珍珍 ,  陈晔 ,  王重刚 ,  左正宏

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/10

Abstract: 一种褐菖鲉CYP1B1基因全长序列及其克隆方法，涉及海洋生物基因工程领域。所述克隆方法：用褐鲳鲉的肝脏组织提取总RNA，进行反转录扩增，采用RACE获得5’端和3’端未知序列，拼接获得其全长cDNA序列。获得了褐菖鲉中CYP1B亚家族唯一成员CYP1B1基因全长CDS序列，补充了褐鲳鲉P450 CYP1B基因家族的空白，可更准确指示海域污染状况，更深入探究海洋生物在污染海域的蛋白表达等问题。通过对材料的处理与准备、RNA提取，5端和3端cDNA合成、RACE技术等获得了CYP1B1基因，该基因cDNA全长为3056bp，基因开放阅读框1724-2995bp，共编码422个氨基酸。

公开(公告)号：CN105755106A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201610167440.5

申请日：2016-03-23

Applicant: 厦门大学

Inventor： 左正宏 ,  杜宏 ,  王重刚 ,  张龙兴 ,  周懿翕 ,  沈超

IPC: C12Q1/66 ,  C12Q1/02

CPC classification number: C12Q1/66 ,  G01N33/5014

Abstract: 一种二噁英类持久性有机污染物检测方法，涉及一种基因工程。按照设计从斑马鱼染色体DNA上PCR扩增出CYP1A启动子序列，构建含有luciferase基因，TA box的PGL6?TA?pCYP1A质粒。通过改造CYP1A启动子，提高重组质粒对TCDD的检测效率，建立了一个快速，高效的检测TCDD以及同样是AHR配体的毒物的系统。利用斑马鱼cyp1a基因启动子序列，利用overlap pcr技术对其进行改造，连接到PGL6?TA载体中，使改造完成的启动子序列对二噁英类持久性有机污染物的敏感度加强，转染到HepG2细胞中，能够快速检测环境中二噁英类持久性有机污染物。