公开(公告)号：CN100500851C

公开(公告)日：2009-06-17

申请号：CN200410091990.0

申请日：2004-12-29

Applicant: 厦门大学

Inventor： 刘广发 ,  张会永 ,  谢金镇

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70

Abstract: 假单胞菌磷酸甘油磷酸酯酶基因及其克隆方法，涉及一种基因克隆，提供一种假单胞菌的磷酸甘油磷酸酯酶结构基因及其一种既快捷又经济的克隆方法。基因总长810bp，前3个字符“atg”为起始符，最后3个字符“tga”为终止符。提取假单胞菌总DNA，用限制性核酸内切酶对总DNA不完全酶切，经电泳，找酶切片段区域，切出凝胶，回收DNA片段；以E.co RI在人工构建的表达载体，将回收的DNA片段与线性载体共育，形成重组质粒，取转化溶液涂抹在高盐LB琼脂培养基上，挑取长出的单菌落耐盐转化子，接种在培养基上。出现的白色菌落即可初步判断为耐盐转化子；重组质粒，用E.co RI切出其中的插入片段，测序；进行基因和蛋白质的同源性比较。

公开(公告)号：CN1670209A

公开(公告)日：2005-09-21

申请号：CN200410091990.0

申请日：2004-12-29

Applicant: 厦门大学

Inventor： 刘广发 ,  张会永 ,  谢金镇

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70

Abstract: 假单胞菌磷酸甘油磷酸酯酶基因及其克隆方法，涉及一种基因克隆，提供一种假单胞菌的磷酸甘油磷酸酯酶结构基因及其一种既快捷又经济的克隆方法。基因总长810bp，前3个字符“atg”为起始符，最后3个字符“tga”为终止符。提取假单胞菌总DNA，用限制性核酸内切酶对总DNA不完全酶切，经电泳，找酶切片段区域，切出凝胶，回收DNA片段；以E.coRI在人工构建的表达载体，将回收的DNA片段与线性载体共育，形成重组质粒，取转化溶液涂抹在高盐LB琼脂培养基上，挑取长出的单菌落耐盐转化子，接种在培养基上。出现的白色菌落即可初步判断为耐盐转化子；重组质粒，用E.coRI切出其中的插入片段，测序；进行基因和蛋白质的同源性比较。