公开(公告)号：CN112831542B

公开(公告)日：2022-10-14

申请号：CN202011599491.8

申请日：2020-12-30

Applicant: 厦门大学

Inventor： 高祥 ,  张展鸣 ,  陈春景 ,  卿萍

IPC: C12Q1/48 ,  G01N33/68 ,  G01N27/626

Abstract: 本发明公开了一种基于MALDI‑TOF‑MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法，包含以下步骤：首先制备CDKs体外磷酸激酶实验缓冲液(KRB)的母液；然后加入待测药物样品进行体外磷酸激酶反应制备质谱分析样品；最后通过MALDI‑TOF‑MS检测来比较样品中磷酸化的短肽和未磷酸化的短肽离子峰的峰面积大小来判断待测药物抑制CDKs的体外活性。本发明所提供的方法是利用药物样品与细胞提取的蛋白激酶在ATP的帮助下进行体外磷酸化对应的底物短肽，然后利用质谱检测出磷酸化的短肽和未磷酸化的短肽，两者的峰面积比反映了抑制CDKs的活性大小。发明所提供的方法采用体外实验和MALDI‑TOF‑MS检测磷酸化结果，样品需求少，药物用量少，不用进行复杂的细胞实验，还可进行大规模的样品筛选。

公开(公告)号：CN112831542A

公开(公告)日：2021-05-25

申请号：CN202011599491.8

申请日：2020-12-30

Applicant: 厦门大学

Inventor： 高祥 ,  张展鸣 ,  陈春景 ,  卿萍

IPC: C12Q1/48 ,  G01N33/68 ,  G01N27/626

Abstract: 本发明公开了一种基于MALDI‑TOF‑MS体外筛选CDKs家族蛋白激酶抑制剂的方法，包含以下步骤：首先制备CDKs体外磷酸激酶实验缓冲液(KRB)的母液；然后加入待测药物样品进行体外磷酸激酶反应制备质谱分析样品；最后通过MALDI‑TOF‑MS检测来比较样品中磷酸化的短肽和未磷酸化的短肽离子峰的峰面积大小来判断待测药物抑制CDKs的体外活性。本发明所提供的方法是利用药物样品与细胞提取的蛋白激酶在ATP的帮助下进行体外磷酸化对应的底物短肽，然后利用质谱检测出磷酸化的短肽和未磷酸化的短肽，两者的峰面积比反映了抑制CDKs的活性大小。发明所提供的方法采用体外实验和MALDI‑TOF‑MS检测磷酸化结果，样品需求少，药物用量少，不用进行复杂的细胞实验，还可进行大规模的样品筛选。