公开(公告)号：CN104109688B

公开(公告)日：2017-03-01

申请号：CN201410351442.0

申请日：2014-07-23

Applicant: 南通大学

Inventor： 路志群 ,  邢述永 ,  李文雪 ,  邓自发

IPC: C12N15/76

Abstract: 本发明公开了一种链霉菌基因组DNA大片段体内随机敲除的方法，包括：1）构建系列重组质粒pTNL_101、pTNL_103、pTNL_104、pTNL_105为第一个sceS酶切位点随机导入质粒；2）将所构建的重组质粒pTNL_101、pTNL_103、pTNL_104、pTNL_105导入天蓝色链霉菌M145，构建随机染色体大片段缺失的突变子库1；3）构建系列重组质粒pTNL_102为第二个sceS酶切位点随机导入质粒，导入突变子库1，获得突变子库2；4）R2YE平板筛选出大片段敲除突变子，精细定位染色体删除区段，并在出发菌株中进行定位敲除予以验证。本发明可以有效随机去除染色体区域可以去除的部分，目前定位结果表明敲除片段长度在2kb-(56)对比文件Zhiqun Lu, 等.Promotion of markerlessdeletion of the actinorhodin biosyntheticgene cluster in Streptomyces coelicolor.《Acta Biochim Biophys Sin》.2010,第42卷(第10期),Gust B, 等.PCR-targeted Streptomycesgene replacement identifies a proteindomain needed for biosynthesis of thesesquiterpene soil odor geosmin《.PNAS》.2003,第100卷(第4期),1541-1546.

公开(公告)号：CN104109688A

公开(公告)日：2014-10-22

申请号：CN201410351442.0

申请日：2014-07-23

Applicant: 南通大学

Inventor： 路志群 ,  邢述永 ,  李文雪 ,  邓自发

IPC: C12N15/76

Abstract: 本发明公开了一种链霉菌基因组DNA大片段体内随机敲除的方法，包括：1）构建系列重组质粒pTNL_101、pTNL_103、pTNL_104、pTNL_105为第一个sceS酶切位点随机导入质粒；2）将所构建的重组质粒pTNL_101、pTNL_103、pTNL_104、pTNL_105导入天蓝色链霉菌M145，构建随机染色体大片段缺失的突变子库1；3）构建系列重组质粒pTNL_102为第二个sceS酶切位点随机导入质粒，导入突变子库1，获得突变子库2；4）R2YE平板筛选出大片段敲除突变子，精细定位染色体删除区段，并在出发菌株中进行定位敲除予以验证。本发明可以有效随机去除染色体区域可以去除的部分，目前定位结果表明敲除片段长度在2kb-100kb之间，为改造链霉菌为抗生素异源表达宿主和底盘生物提供依据。