无机磷酸盐刺激瓣膜间质细胞成骨分化的验证方法

    公开(公告)号:CN110938669A

    公开(公告)日:2020-03-31

    申请号:CN201911323371.2

    申请日:2019-12-20

    Abstract: 一种无机磷酸盐刺激瓣膜间质细胞成骨分化的验证方法,包括:在提取大鼠瓣膜间质细胞分别使用CON、IP-OIM与OIM进行成骨分化培养后,提取蛋白制成蛋白样品;对三种蛋白样品分别使用ALP染色、茜素红染色后,采用ALP活性检测以及相对钙含量测定方法评估染色后的成骨分化程度,并通过WB法、RT-PCR法分别检测BMP-2、RhoA及Rock-1的表达变化;通过si-RNA技术分别干扰BMP-2及RhoA的表达,并观察其相互之间变化的关系,以及干扰后是否有对抗成骨分化的作用;研究IP-OIM对SMAD1/5/9磷酸化的影响,以及BMP-2/SMAD1/5/9以及RhoA/Rock-1两条通路之间的相互关系。本发明确定无机磷酸盐通过BMP-2/smad1/5/9以及RhoA/Rock-1信号通路引起瓣膜间质细胞的钙化形成,及在瓣膜间质细胞成骨分化过程中BMP-2/SMAD1/5/9通路是RhoA/Rock-1通路的上游通路,并且起着正向调控的作用。

    无机磷酸盐刺激瓣膜间质细胞成骨分化的验证方法

    公开(公告)号:CN110938669B

    公开(公告)日:2023-03-28

    申请号:CN201911323371.2

    申请日:2019-12-20

    Abstract: 一种无机磷酸盐刺激瓣膜间质细胞成骨分化的验证方法,包括:在提取大鼠瓣膜间质细胞分别使用CON、IP‑OIM与OIM进行成骨分化培养后,提取蛋白制成蛋白样品;对三种蛋白样品分别使用ALP染色、茜素红染色后,采用ALP活性检测以及相对钙含量测定方法评估染色后的成骨分化程度,并通过WB法、RT‑PCR法分别检测BMP‑2、RhoA及Rock‑1的表达变化;通过si‑RNA技术分别干扰BMP‑2及RhoA的表达,并观察其相互之间变化的关系,以及干扰后是否有对抗成骨分化的作用;研究IP‑OIM对SMAD1/5/9磷酸化的影响,以及BMP‑2/SMAD1/5/9以及RhoA/Rock‑1两条通路之间的相互关系。本发明确定无机磷酸盐通过BMP‑2/smad1/5/9以及RhoA/Rock‑1信号通路引起瓣膜间质细胞的钙化形成,及在瓣膜间质细胞成骨分化过程中BMP‑2/SMAD1/5/9通路是RhoA/Rock‑1通路的上游通路,并且起着正向调控的作用。

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