公开(公告)号：CN118440933A

公开(公告)日：2024-08-06

申请号：CN202410409451.4

申请日：2024-04-07

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  王蓉蓉 ,  陈红 ,  田冰坤 ,  郭新月 ,  潘豪 ,  潘振康 ,  李谋 ,  汤庆春

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种基于尿嘧啶碱基PCR的基因组步移方法，包括：1）在初级PCR中使用dUTP代替dTTP进行扩增；2）对初级PCR产物过柱纯化去除多余的底物、引物和酶；3）然后用初级特异性引物Specific primer，SP和四种正常碱基（A、T、C、G），对纯化产物进行单引物单循环扩增，合成完全由正常碱基组成的单链DNA；4）随后对单引物单循环扩增产物进行UNG处理，破坏含U的DNA，而在单引物单循环扩增中合成的分子则不受影响；5）最后目标单链DNA分子在后续的高严格循环中被特异性引物SP2和AP进行指数扩增得到目的产物。本发明方法能够有效扩增目标DNA分子，抑制非目标产物的扩增，相较传统PCR方法，具有更高的成功率和步移效率。

公开(公告)号：CN118048440A

公开(公告)日：2024-05-17

申请号：CN202410104483.3

申请日：2024-01-25

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  田冰坤 ,  陈红 ,  王蓉蓉 ,  潘豪 ,  潘振康 ,  郭新月 ,  汤庆春 ,  李谋

IPC: C12Q1/686 ,  C12Q1/6848 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于N7HW‑PCR的基因组步移引物及方法，通过将一级PCR的随机步移引物pWP的5’端的7个碱基简并为N7，其余部分保持不变，得到引物ds/tWP；将ds/tWP用于二级和三级PCR中，使得二级、三级步移引物与一级步移引物之间不完全匹配，进而使一级PCR所得非目标产物在二级和三级PCR中不能被有效扩增而被消除。本发明方法相较于传统PCR方法，具有引物用量少、操作简单、效率高等优点。

公开(公告)号：CN117844910A

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202311854834.4

申请日：2023-12-29

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  陈红 ,  王蓉蓉 ,  田冰坤 ,  李谋 ,  汤庆春 ,  潘振康 ,  潘豪 ,  郭新月

IPC: C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于尿嘧啶引物PCR的基因组步移方法，通过在随机引物（arbitrary walking primer，AWP）3’端的倒数第二个位置引入了尿嘧啶碱基，并在二级UP‑PCR之前，使AWP序列在UNG的作用下被破坏，使得在二级UP‑PCR的热循环中，避免不需要的扩增子被扩增，仅两轮UP‑PCR就足以完成基因组步移任务，并获得足够的扩增特异性，相较传统的热不对称交错PCR、腕表PCR、桥接PCR等基因组步移方法更为简单易行，且具有同等的成功率。

公开(公告)号：CN117721189A

公开(公告)日：2024-03-19

申请号：CN202311541767.0

申请日：2023-11-18

Applicant: 南昌大学

Inventor： 李海星 ,  郭新月 ,  潘豪 ,  潘振康 ,  陈红 ,  王蓉蓉 ,  田冰坤

IPC: C12Q1/686

Abstract: 本发明提供了一种巢式位点特异性单引物PCR方法及其应用。本发明提供的方法从每个遗传位点上鉴定出3个引物，引物A、B、C，首先，在60℃条件下引物A在基因组的特定位置合成ssDNA，随后的25℃，使得引物A有机会退火至刚刚合成的靶ssDNA上未知区域的某些位点，这样便成功实现了引物A的步移。随后的第二轮和第三轮PCR中，引物B和引物C完成相同的步移，此方法成功建立；而非目标产物在第二轮和第三轮反应过程中被抑制。本发明提供的方法能够通过一段已知序列即可探索其侧翼的未知序列，同时本发明能够应用于基因测序中缺口的填补。