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公开(公告)号：CN111549098B
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202010546218.2
申请日：2020-06-16
Applicant: 南开大学
IPC: C12Q1/6804 , G16B5/00 , G16B30/00
Abstract: 本发明涉及一种测量人端粒精准长度的单分子力学方法。首先，提取目标细胞的基因组DNA；使用组合酶切，消化基因组，保留端粒DNA；分别采用地高辛和生物素对端粒DNA两端进行亲和标记，从而获得可用于单分子力学测量的端粒DNA结构。其次，将端粒结构固定于链霉亲和素包被的磁珠和抗地高辛抗体铺敷的玻璃表面之间，在单分子仪器上进行DNA力学拉伸实验。最后，使用蠕虫模型，对实测端粒长度进行纳米与碱基对之间的长度转换，即可实现端粒长度的精准测量。本发明属于精密仪器测量分析与细胞分子生物学领域，为细胞研究、健康筛查和临床药物疗效评估开发了一种直接测量端粒精准长度的新方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109750055A
公开(公告)日：2019-05-14
申请号：CN201910188876.6
申请日：2019-03-13
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明提供一种基于α螺旋把手提高蛋白核酸生物耦合效率的方法；首先设计携带非天然氨基酸的把手H-tag，其次构建含有H-tag和待测蛋白的融合重组表达质粒，再次表达纯化在H-tag中含有非天然氨基酸的融合重组蛋白，最后对融合蛋白H-tag中非天然氨基酸和核酸底物上的耦合基团进行高效点击化学连接。本方法使用α螺旋把手为非天然氨基酸提供可控的蛋白表面反应条件，避免待测蛋白表面复杂的结构、电荷和极性纳米环境，从而实现对蛋白与核酸进行高效点击化学连接等目标。
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公开(公告)号：CN110396535B
公开(公告)日：2022-12-23
申请号：CN201910380148.5
申请日：2019-05-08
Applicant: 南开大学
IPC: C12Q1/6834 , C12Q1/6876 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供一种应用于探测CGI序列甲基化调控CXXC结构域位点特异性结合的方法。通过构建CGI发夹结构，并将CGI发夹结构连接到反应池的底面和微球表面，在单分子操纵技术的操控下，微球受到拉力，进而在没有CXXC结构域存在的条件下CGI发夹结构被拉伸，CGI发夹结构被迅速打开；当在有CXXC结构域存在的情况下，CGI发夹结构的打开过程被结合在其上的CXXC结构域阻碍，产生停顿信号；对未修饰的CGI序列和甲基化修饰的CGI序列中停顿信号事件的发生次数进行计数，判断CXXC结构域对处于不同表观遗传修饰状态的CGI序列特异性位点结合的变化，从而揭示CGI的表观遗传修饰对基因转录活性的影响机制，为理解细胞的生命活动和细胞的癌变机制提供一种单分子水平的实验检测方法。
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公开(公告)号：CN109750055B
公开(公告)日：2022-12-23
申请号：CN201910188876.6
申请日：2019-03-13
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明提供一种基于α螺旋把手提高蛋白核酸生物耦合效率的方法；首先设计携带非天然氨基酸的把手H‑tag，其次构建含有H‑tag和待测蛋白的融合重组表达质粒，再次表达纯化在H‑tag中含有非天然氨基酸的融合重组蛋白，最后对融合蛋白H‑tag中非天然氨基酸和核酸底物上的耦合基团进行高效点击化学连接。本方法使用α螺旋把手为非天然氨基酸提供可控的蛋白表面反应条件，避免待测蛋白表面复杂的结构、电荷和极性纳米环境，从而实现对蛋白与核酸进行高效点击化学连接等目标。
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公开(公告)号：CN111549098A
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN202010546218.2
申请日：2020-06-16
Applicant: 南开大学
IPC: C12Q1/6804 , G16B5/00 , G16B30/00
Abstract: 本发明涉及一种测量人端粒精准长度的单分子力学方法。首先，提取目标细胞的基因组DNA；使用组合酶切，消化基因组，保留端粒DNA；分别采用地高辛和生物素对端粒DNA两端进行亲和标记，从而获得可用于单分子力学测量的端粒DNA结构。其次，将端粒结构固定于链霉亲和素包被的磁珠和抗地高辛抗体铺敷的玻璃表面之间，在单分子仪器上进行DNA力学拉伸实验。最后，使用蠕虫模型，对实测端粒长度进行纳米与碱基对之间的长度转换，即可实现端粒长度的精准测量。本发明属于精密仪器测量分析与细胞分子生物学领域，为细胞研究、健康筛查和临床药物疗效评估开发了一种直接测量端粒精准长度的新方法。
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公开(公告)号：CN110396535A
公开(公告)日：2019-11-01
申请号：CN201910380148.5
申请日：2019-05-08
Applicant: 南开大学
IPC: C12Q1/6834 , C12Q1/6876 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供一种应用于探测CGI序列甲基化调控CXXC结构域位点特异性结合的方法。通过构建CGI发夹结构，并将CGI发夹结构连接到反应池的底面和微球表面，在单分子操纵技术的操控下，微球受到拉力，进而在没有CXXC结构域存在的条件下CGI发夹结构被拉伸，CGI发夹结构被迅速打开；当在有CXXC结构域存在的情况下，CGI发夹结构的打开过程被结合在其上的CXXC结构域阻碍，产生停顿信号；对未修饰的CGI序列和甲基化修饰的CGI序列中停顿信号事件的发生次数进行计数，判断CXXC结构域对处于不同表观遗传修饰状态的CGI序列特异性位点结合的变化，从而揭示CGI的表观遗传修饰对基因转录活性的影响机制，为理解细胞的生命活动和细胞的癌变机制提供一种单分子水平的实验检测方法。
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