公开(公告)号：CN108048400B

公开(公告)日：2021-04-09

申请号：CN201711435471.5

申请日：2017-12-26

Applicant: 南开大学

Inventor： 帅领 ,  王海松 ,  张文豪

IPC: C12N5/0797

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，在原有普通猴子干细胞培养基的基础上进行优化培养，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y‑27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培养基；将初步形成神经外胚层的EB球种在基底胶铺底的培养皿中，加入神经诱导培养基进行分化；挑取神经花环，种在30μg/ml多鸟氨酸和3μg/ml层粘连蛋白铺底的培养皿中；培养14天后，进行流式细胞术，分选单倍体细胞。本发明第一次实现了在体外获得猴子单倍体神经干细胞，并具有向神经下游方向分化的能力。

公开(公告)号：CN107828826A

公开(公告)日：2018-03-23

申请号：CN201711318006.3

申请日：2017-12-12

Applicant: 南开大学

Inventor： 帅领 ,  李艳妮 ,  李旭 ,  张文豪 ,  王海松

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  C12N5/10

CPC classification number: C12N15/907 ,  C12N5/0623 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明涉及细胞生物学技术领域，具体来说是一种体外高效获得神经干细胞的方法，A、通过CRISPR/Cas9系统构建拥有Pax6-GFP报告系统的胚胎干细胞细胞系；B、Pax6-GFP ES报告系统在体外和体内指示神经分化；C、Pax6-GFP报告系统富集纯化神经干细胞；本发明使用CRISPR/Cas9基因编辑工具构建了具有Pax6-GFP荧光报告系统的细胞系，并通过这个细胞系实现了体外神经干细胞的快速、高效获得。

公开(公告)号：CN108048400A

公开(公告)日：2018-05-18

申请号：CN201711435471.5

申请日：2017-12-26

Applicant: 南开大学

Inventor： 帅领 ,  王海松 ,  张文豪

IPC: C12N5/0797

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，在原有普通猴子干细胞培养基的基础上进行优化培养，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y‑27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培养基；将初步形成神经外胚层的EB球种在基底胶铺底的培养皿中，加入神经诱导培养基进行分化；挑取神经花环，种在30μg/ml多鸟氨酸和3μg/ml层粘连蛋白铺底的培养皿中；培养14天后，进行流式细胞术，分选单倍体细胞。本发明第一次实现了在体外获得猴子单倍体神经干细胞，并具有向神经下游方向分化的能力。