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公开(公告)号：CN106854646A
公开(公告)日：2017-06-16
申请号：CN201611190475.7
申请日：2016-12-21
Applicant: 南开大学
IPC: C12N5/10
Abstract: 本发明是一种维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的低表达Lin28的小鼠胚胎干细胞的制备方法。该方法是将序列表中序列1的Lin28干扰序列构建在RNAi‑ReadypSIREN‑RetroQ干扰载体中，获得含有RNA‑Lin28干扰重组质粒；并通过脂质体（Lipofactamine2000）转染的方法将RNA‑Lin28干扰重组质粒转染到小鼠胚胎干细胞D3中，并通过重组载体上含有的抗药物筛选基因嘌呤霉素(puromycin)通过加入药物进行筛选并建立转基因细胞系，以所述转基因细胞进行小鼠胚胎干细胞Naive状态的各种指标监控，发现Lin28表达降低对小鼠胚胎干细胞Naive状态维持起到促进作用。本发明的方法能在转基因小鼠胚胎干细胞中内稳定干扰Lin28表达，显著提高维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的能力。
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