公开(公告)号：CN109929031A

公开(公告)日：2019-06-25

申请号：CN201910145037.6

申请日：2019-02-27

Applicant: 南京理工大学

Inventor： 汪洋 ,  杨慕晗 ,  程鑫茹 ,  李晓波 ,  王玉琪 ,  连慧慧

IPC: C07K16/00 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种细菌双杂交纳米抗体筛选系统及其构建方法和应用。所述的细菌双杂交纳米抗体筛选系统由含有LexAWT基因元件的pMHA2质粒和含有LexA408基因元件的pMHN2质粒组成。嵌合型双抑制子LexAWT/LexA408可以联同抗原抗体相互作用抑制下游PsulA-cI857基因的表达，间接激活PR-KanR基因的表达，构建严谨高效的纳米抗体阳性筛选系统。候选纳米抗体为合成文库，采用简并引物的方式在CDR3区域引入48个随机碱基并去除了终止密码子以及半胱氨酸密码子。本发明的细菌双杂交纳米抗体筛选系统能够快速、高效、准确地筛选给定抗原的纳米抗体。

公开(公告)号：CN107937426A

公开(公告)日：2018-04-20

申请号：CN201610892336.2

申请日：2016-10-12

Applicant: 南京理工大学

Inventor： 汪洋 ,  张开 ,  易军 ,  苏会娟 ,  杨慕晗

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06

CPC classification number: C12N15/63 ,  C12N15/1093 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种零背景的平末端克隆载体pRI857构建及其在基因克隆和基因文库构建中的应用，属于生物技术领域。所述的质粒pRI857含有Plac启动子，cI857阻遏基因，噬菌体PR启动子，KanR抗性标记，dbl终止子和ColE1复制子基因元件。平末端克隆载体pRI857通过cI857阻遏基因控制PR启动子下游基因KanR的转录，37℃时克隆载体pRI857可进行复制，30℃时，pRI857对重组质粒进行筛选，通过这一技术进行分子克隆，可以获得100％的阳性克隆。此外，该克隆载体也可用于基因组文库的高效构建，同时能有效避免空载体干扰，是后基因组时代高通量基因筛选与功能验证的一种有效工具。