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公开(公告)号：CN111235219A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010063982.4
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物中漆酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的检测凋落物中漆酶活性的方法：称取过筛的凋落物碎屑到离心过滤管中，加入培养缓冲液低温孵育，高速离心后将酶滤液混合并调节至一定体积；将上步稀释的酶液避光条件下加热制作对照灭活酶液；将待测稀释酶液和对照灭活酶液分别加入酶活孔和阴性孔，再加入ABTS底物工作液，避光条件下，22℃震荡孵育；测定420nm波长下的吸光值OD；计算稀释因子F；计算漆酶活性。本发明的优点为：采用微小孔径离心过滤管，大大降低了酶液中的干扰物质；反应体系优化后，各处理反应条件一致，灵敏度高，结果可靠；批量获得结果数据，上机时间缩短，效率高效。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111235219B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202010063982.4
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物中漆酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的检测凋落物中漆酶活性的方法：称取过筛的凋落物碎屑到离心过滤管中，加入培养缓冲液低温孵育，高速离心后将酶滤液混合并调节至一定体积；将上步稀释的酶液避光条件下加热制作对照灭活酶液；将待测稀释酶液和对照灭活酶液分别加入酶活孔和阴性孔，再加入ABTS底物工作液，避光条件下，22℃震荡孵育；测定420nm波长下的吸光值OD；计算稀释因子F；计算漆酶活性。本发明的优点为：采用微小孔径离心过滤管，大大降低了酶液中的干扰物质；反应体系优化后，各处理反应条件一致，灵敏度高，结果可靠；批量获得结果数据，上机时间缩短，效率高效。
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公开(公告)号：CN111057751A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN202010063983.9
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR检测土壤真菌数量的方法，属于土壤真菌数量检测领域。本发明公开的方法主要包括：称取过筛的新鲜土壤，利用试剂盒提取土壤总DNA，统一稀释到一定浓度；将生长适度的模板射纹革菌的菌丝利用CTAB法提取总DNA，制备成标准曲线系列模板DNA溶液；将标准曲线或待测土壤模板DNA溶液构建qPCR反应体系，包括根据真菌18S核糖体rRNA保守序列设计的通用qPCR引物；利用ABI7500实时荧光定量PCR仪进行qPCR反应；绘制出标准曲线；计算每克干土中真菌数量。本发明提供的检测土壤真菌数量的方法，操作安全简便，引物序列特异性好，灵敏度高，结果精准可靠，重现性好。
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公开(公告)号：CN111707645A
公开(公告)日：2020-09-25
申请号：CN202010063061.8
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的方法为：将凋落物样品破碎后装到离心过滤管中，添加培养缓冲液低温培养后高速离心并混合滤液定容至一定体积，制备灭活酶液；将酶活性液和灭活酶液依次分别添加酶活性孔和阴性对照孔，再添加4-MUB-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷工作液，在遮光条件下震荡培养；培养后，向所有酶标孔添加Tris终止液；利用多功能酶标仪进行MUB荧光检测；计算乙酰氨基葡萄糖苷酶比酶活。本发明采用离心过滤管，降低了酶液中的干扰物质；优化了反应体系，灵敏度高，酶液耗量少，反应终止后，测试液pH对上机数据没有影响，真实有效反映凋落物中酶活性。
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公开(公告)号：CN111057782A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN202010063347.6
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06
Abstract: 本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR检测土壤细菌数量的方法，属于生物技术领域。本方法包括以下步骤：1)提取土壤样品总DNA并调整到预设浓度，制备成待测土壤样品模板DNA溶液；2)提取模板大肠杆菌总DNA，测定DNA浓度，并制备标准曲线模板DNA溶液；3)对待测土壤样品模板DNA溶液和标准曲线模板DNA溶液进行实时荧光定量PCR扩增；4)绘制出标准曲线；5)计算每克干土中细菌数量。本方法省去添加内标菌株荧光镜检等步骤，大大降低操作难度；且不需要经过连接、转化，再以qPCR扩增，操作简便易学；目标片段特异性好，数据精准度高，重现性好。
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公开(公告)号：CN111707645B
公开(公告)日：2023-05-16
申请号：CN202010063061.8
申请日：2020-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/34
Abstract: 本发明公开了一种检测凋落物乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的方法为：将凋落物样品破碎后装到离心过滤管中，添加培养缓冲液低温培养后高速离心并混合滤液定容至一定体积，制备灭活酶液；将酶活性液和灭活酶液依次分别添加酶活性孔和阴性对照孔，再添加4‑MUB‑β‑D‑乙酰氨基葡萄糖苷工作液，在遮光条件下震荡培养；培养后，向所有酶标孔添加Tris终止液；利用多功能酶标仪进行MUB荧光检测；计算乙酰氨基葡萄糖苷酶比酶活。本发明采用离心过滤管，降低了酶液中的干扰物质；优化了反应体系，灵敏度高，酶液耗量少，反应终止后，测试液pH对上机数据没有影响，真实有效反映凋落物中酶活性。
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