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公开(公告)号：CN110423742A
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201910698944.3
申请日：2019-07-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种通过磁性铁蛋白表面展示实现酶固定的方法，构建含Ecoil短肽的铁蛋白重组质粒和含Kcoil短肽的酶重组质粒；将构建好的重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株TOP10感受态细胞，获得相应的基因工程菌株；将基因工程菌接种于LB培养基中诱导培养，利用亲和层析和体积排阻色谱得到纯化的铁蛋白与酶；在纯化的铁蛋白内部空腔中合成Fe3O4；将获得的磁性铁蛋白与酶混合，通过Ecoil螺旋肽和Kcoil螺旋肽的相互作用，可形成磁性铁蛋白固定化酶。本发明采用基因融合，与以传统共价键的方式实现酶的固定化相比，避免了酶活性中心的破坏，明显提高了表面展示酶的效果和酶活，也大大降低了成本。
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公开(公告)号：CN110423742B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN201910698944.3
申请日：2019-07-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种通过磁性铁蛋白表面展示实现酶固定的方法，构建含Ecoil短肽的铁蛋白重组质粒和含Kcoil短肽的酶重组质粒；将构建好的重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株TOP10感受态细胞，获得相应的基因工程菌株；将基因工程菌接种于LB培养基中诱导培养，利用亲和层析和体积排阻色谱得到纯化的铁蛋白与酶；在纯化的铁蛋白内部空腔中合成Fe3O4；将获得的磁性铁蛋白与酶混合，通过Ecoil螺旋肽和Kcoil螺旋肽的相互作用，可形成磁性铁蛋白固定化酶。本发明采用基因融合，与以传统共价键的方式实现酶的固定化相比，避免了酶活性中心的破坏，明显提高了表面展示酶的效果和酶活，也大大降低了成本。
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公开(公告)号：CN111948589A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN201910416453.5
申请日：2019-05-17
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及一种蔗糖密度梯度离心分离铁蛋白纳米颗粒的方法。该方法的具体步骤为：首先将蔗糖溶于缓冲液中，配制质量百分比浓度分别为20％，35％，50％，65％的蔗糖溶液，采用层铺法，依次缓慢滴加一定量的蔗糖溶液；然后将装载四氧化三铁后的铁蛋白样品缓慢加到蔗糖梯度溶液中；在4℃，50,000rpm，5h的条件下，进行水平离心；最后将混合液缓慢等分吸出，利用紫外分光光度计分别在280nm和410nm波长下分别测定所在蔗糖溶液层的蛋白质含量和铁含量。最终分离得到在铁蛋白空腔内装载了四氧化三铁的铁蛋白，实现了铁蛋白空腔内是否装载四氧化三铁的分离，为分离铁蛋白提供除磁场分离以外的另一种简便可行的方法。
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