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公开(公告)号：CN114457079A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210169575.0
申请日：2022-02-23
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/20 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种杨树飞絮发育特异表达启动子ProMIXTA及其应用，属于生物技术和植物基因工程技术领域。其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明将ProMIXTA启动子与标记基因GUS融合，通过农杆菌GV3101介导稳定转化拟南芥，与阳性对照具有相近的表达活性。结合PdeMIXTA基因在不同组织间的表达模式及组织原位杂交实验结果，证实了ProMIXTA启动子可以启动相应的目的基因PdeMIXTA在杨絮细胞中特异表达，在杨絮细胞中特异敲除或沉默内源目的基因，有助于探究目的基因对杨絮细胞分化发育的调控作用，进而为无絮杨新种质的创制提供有效的基因工具，具有重要意义。
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公开(公告)号：CN116622736A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310648410.6
申请日：2023-06-02
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , C12N15/11 , C12Q1/6895 , A01H5/12 , A01H6/00
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，公开了一种调控杨树叶片表皮毛发育的基因MIXTA04，所述基因MIXTA04的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。同时，本发明还公开了一种调控杨树叶片表皮毛发育的蛋白MIXTA04，所述蛋白MIXTA04的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用扫描电镜对美洲黑杨(Populus deltoides)和山新杨(P.davidiana×P.bolleana)叶片表皮毛进行观察，对MIXTA04基因在不同部位的叶片中的基因表达模式进行分析，结合拟南芥的遗传转化进行基因功能验证，首次公开了调控杨树叶片表皮毛发育的MIXTA04基因。本发明通过实验证实MIXTA04基因在杨树叶片表皮毛发育过程中起调控作用，为通过遗传转化技术提高杨树叶片表皮毛密度，降低食草动物对叶片的啃食，创制杨树抗虫新种质，提供可靠的靶基因和重要的理论支持。
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公开(公告)号：CN114891080B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN202210489873.8
申请日：2022-05-07
Applicant: 南京林业大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明首次公开了MBW复合体(PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40)，调控杨絮起始发育，属于植物基因工程技术领域。本发明以杨树的PdeMIXTA基因为诱饵蛋白，对杨絮起始发育时期的的雌花芽的酵母文库进行筛选，得到两个互作蛋白PdeMYC和PdeWD40,通过酵母双杂交实验，双分子萤光互补实验和荧光素酶互补实验，验证了在杨树中PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40形成MBW复合体行使功能，把杨树PdeMIXTA基因在拟南芥无毛突变体gl1中过量表达，可以恢复其野生型毛状体表型，表明该基因可以促进拟南芥表皮细胞凸起分化为表皮毛。以上证实MBW复合体是调控絮的起始发育的关键复合物，为通过基因编辑技术创制无絮杨新品种，提供可靠的靶基因和重要的理论支持。
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公开(公告)号：CN113322346B
公开(公告)日：2022-07-08
申请号：CN202110760927.5
申请日：2021-07-06
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种簸箕柳雌花荧光定量的内参基因及其专用引物和应用。本发明选择簸箕柳雌花为实验材料，这些雌花涵盖4个不同发育阶段：雌蕊分化期、休眠期、初花期和盛花期，依次通过荧光定量PCR分析，扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析，筛选出符合适用于簸箕柳雌花荧光定量PCR的2个内参基因(α‑TUB1和ACT)，其中，α‑TUB1基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，ACT基因的基因序列如SEQ ID NO.2所示，并用这些基因为基础设计了实时荧光定量PCR引物，填补了不同发育时期的簸箕柳雌花没有内参基因的现状，为簸箕柳雌花发育相关功能基因的精确定量提供有力支持，可提高研究的稳定性和准确性。
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公开(公告)号：CN113416794B
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202110760926.0
申请日：2021-07-06
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种簸箕柳雄花荧光定量的内参基因及其专用引物和应用。本发明选择簸箕柳雄花为实验材料，这些雄花涵盖4个不同发育阶段：雄花分化期、休眠期、初花期和盛花期。依次通过荧光定量PCR分析，扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析，筛选出符合适用于簸箕柳雄花荧光定量PCR的2个内参基因(DnaJ和ACT)，其中，DnaJ基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，ACT基因的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本申请填补了不同发育时期的簸箕柳雄花没有内参基因的现状，为簸箕柳雄花发育相关功能基因的精确定量提供有力支持，可提高研究的稳定性和准确性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113322346A
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202110760927.5
申请日：2021-07-06
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种簸箕柳雌花荧光定量的内参基因及其专用引物和应用。本发明选择簸箕柳雌花为实验材料，这些雌花涵盖4个不同发育阶段：雌蕊分化期、休眠期、初花期和盛花期，依次通过荧光定量PCR分析，扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析，筛选出符合适用于簸箕柳雌花荧光定量PCR的2个内参基因(α‑TUB1和ACT)，其中，α‑TUB1基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，ACT基因的基因序列如SEQ ID NO.2所示，并用这些基因为基础设计了实时荧光定量PCR引物，填补了不同发育时期的簸箕柳雌花没有内参基因的现状，为簸箕柳雌花发育相关功能基因的精确定量提供有力支持，可提高研究的稳定性和准确性。
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公开(公告)号：CN112889668A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110139950.2
申请日：2021-02-01
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，公开了一种以杨树叶柄为外植体进行农杆菌侵染的高效遗传转化方法。本发明选择美洲黑杨和欧美杨的杂交种为实验材料，通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301载体转化NL895外植体。对本发明以叶柄为外植体和以叶片为外植体的对照组进行侵染后的转化效率进行比较，发现以叶柄为外植体转化效率高达80.6％，比传统方法以叶片为外植体进行侵染转化效率提高5倍以上。首次公开了以NL895叶柄为外植体进行农杆菌侵染的方法，建立了一套针对NL895叶柄的杨树高效遗传转化完整体系，与选择叶片为外植体的传统方法相比转化效率有大幅度提高，同时可以提高分子育种效率，也可以为杨树转基因材料的创制和重要性状基因的功能验证提供了重要工具。
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公开(公告)号：CN111172172B
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202010100801.0
申请日：2020-02-18
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了美洲黑杨杨絮起始发育的调控基因PdeMIXTA02及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明通过基因序列进化分析和杨絮起始发育前后不同时间点的基因表达分析，综合拟南芥的遗传转化功能验证，首次公开了调控杨絮起始发育基因PdeMIXTA02。该基因属于MIXTA类转录因子家族，序列进化分析显示与调控棉絮起始发育的关键基因GhMML3和GhMML4为同一MIXTA亚类分支，只存在于杨树雌性花絮授粉后5天内特异表达，在拟南芥中过量表达可以极显著增加表皮毛的数量，促进拟南芥的表皮细胞凸起分化为表皮毛。以上证实PdeMIXTA02基因调控杨絮的起始发育，可用于培育不飞絮杨树新品种。
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公开(公告)号：CN116218898A
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202310162653.9
申请日：2023-02-24
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/29 , C12N15/113 , A01H5/02 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种培育不飞絮无花粉美洲黑杨的方法及其采用的sgRNA，属于生物技术和植物基因工程技术领域。本发明对美洲黑杨雄株Y染色单体上特异序列进行分析，设计靶向Y特异序列(YHS)的保守sgRNAs，利用CRISPR技术，在杨树雄株中实现对Y特异序列进行有效编辑，促使杨树性别转换，同时对调控杨絮发育的基因进行编辑，创制不飞絮无花粉杨树新种质。本发明为利用基因编辑技术手段创制不飞絮无花粉杨树新品种，克服杨树飞絮及花粉污染提供了有效工具，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113416794A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110760926.0
申请日：2021-07-06
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种簸箕柳雄花荧光定量的内参基因及其专用引物和应用。本发明选择簸箕柳雄花为实验材料，这些雄花涵盖4个不同发育阶段：雄花分化期、休眠期、初花期和盛花期。依次通过荧光定量PCR分析，扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析，筛选出符合适用于簸箕柳雄花荧光定量PCR的2个内参基因(DnaJ和ACT)，其中，DnaJ基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，ACT基因的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本申请填补了不同发育时期的簸箕柳雄花没有内参基因的现状，为簸箕柳雄花发育相关功能基因的精确定量提供有力支持，可提高研究的稳定性和准确性。
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