公开(公告)号：CN109825601A

公开(公告)日：2019-05-31

申请号：CN201910139786.8

申请日：2019-02-25

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 吴小芹 ,  刘红斌 ,  叶建仁 ,  冯亚颀 ,  芮琳

IPC: C12Q1/6888 ,  G01N33/53 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种定量检测松材线虫自噬活性的方法，先构建松材线虫自噬标志蛋白BxATG8的原核表达载体pET-28a(+)-BxATG8，然后进行表达和纯化重组蛋白BxATG8，并将其免疫新西兰大白兔，制备出特异性多克隆抗体anti-BxATG8；采用特异性多克隆抗体anti-BxATG8同时特异性识别松材线虫自噬蛋白BxATG8-I和BxATG8-II，对BxATG8-I和BxATG8-II的表达进行均一化和定量分析，获得BxATG8-II/BxATG8-I表达量比值。本发明通过定量检测松材线虫自噬活性方法的建立，对研究自噬在松材线虫防御机制中的作用至关重要，有助于为松材线虫病的防控提供理论基础，所制备的特异性多克隆抗体anti-BxATG8可以同时特异性识别松材线虫自噬蛋白BxATG8-I和BxATG8-II，其效价高达1∶512,000。为以后深入研究自噬在松材线虫中的作用提供关键的科研手段和技术支持。