一种耐热α-L-鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用

    公开(公告)号:CN117187216A

    公开(公告)日:2023-12-08

    申请号:CN202311263540.4

    申请日:2023-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用,属于基因工程及酶工程技术领域。本发明从Dictyoglomus thermophilum DSM 3960基因组中克隆得到一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,与现有技术相比,本发明所提供的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha具有优良的耐热性能,对耐热的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha进行耐糖关键位点突变,获得的新型α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha耐糖突变体,其耐糖系数提高了2.3倍以上,该突变体能够特异性水解淫羊藿苷的R2位上通过α‑1糖苷键连接的鼠李糖,能够利用突变体高效转化淫羊藿苷生成淫羊藿次苷I。

    一种固定化β-D-葡萄糖苷酶的制备方法及其在转化淫羊藿总黄酮中的应用

    公开(公告)号:CN116855488A

    公开(公告)日:2023-10-10

    申请号:CN202310677975.7

    申请日:2023-06-08

    Abstract: 一种固定化β‑D‑葡萄糖苷酶的制备方法及其在转化淫羊藿黄酮中的应用,步骤为(1)融合β‑D‑葡萄糖苷酶4LP‑Tpebg13的构建;(2)4LP‑Tpebg13的纯化;(3)沸石活化;(4)4LP‑Tpebg13的固定化;(5)4LP‑Tpebg13的特异性吸附;(6)固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y转化淫羊藿黄酮中的应用。本发明利用Na‑Y沸石为固定化载体,加入融合β‑D‑葡萄糖苷酶4LP‑Tpebg13,构建固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y,其酶活回收率为53.2%,连接肽的引入使蛋白负载量提高了40.0%。含有连接肽的固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y具备更好的结合稳定性、底物亲和力和催化效率。4LP‑Tpebg13@Na‑Y转化淫羊藿黄酮的最适条件为:底物淫羊藿苷浓度为1.4mM,酶用量0.5U/mL,pH 5.0,80℃、反应时间1h,摩尔转化率高达95.7%。连接肽提高了固定化酶的稳定性和重复利用性,重复使用10次后,4LP‑Tpebg13@Na‑Y保留77.1%催化活性,比Tpebg13@Na‑Y高40.9%。

    一种气流铺装机的铺装箱体结构优化设计方法

    公开(公告)号:CN110543726A

    公开(公告)日:2019-12-06

    申请号:CN201910833831.X

    申请日:2019-09-04

    Abstract: 本发明公开了一种气流铺装机的铺装箱体结构优化设计方法,该方法步骤为:A、建立至少2种不同结构的铺装箱体模型;B、分别将各种铺装箱体模型的生成文件进行网格划分并把生成的网格文件导入CFD软件;C、在CFD软件中设定模型参数以及变量参数;D、CFD软件模拟空气流动达到准稳态后,提取各流场的分布特征以及颗粒沉积情况;E、比对出气流平稳、压力低且颗粒沉积均匀的模型作为预选方案;F、对所述预选方案做至少一次铺装箱体模型修改,并重复上述步骤确定最终铺装箱体模型;G、结合所述的最终铺装箱体模型生产气流铺装机样机,进行气流速度测试和刨花沉积试验。本发明的方法能够降低生产刨花板的成本、提高板坯的铺装质量。

    一种耐热α-L-鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用

    公开(公告)号:CN117187216B

    公开(公告)日:2025-04-08

    申请号:CN202311263540.4

    申请日:2023-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用,属于基因工程及酶工程技术领域。本发明从Dictyoglomus thermophilum DSM 3960基因组中克隆得到一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,与现有技术相比,本发明所提供的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha具有优良的耐热性能,对耐热的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha进行耐糖关键位点突变,获得的新型α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha耐糖突变体,其耐糖系数提高了2.3倍以上,该突变体能够特异性水解淫羊藿苷的R2位上通过α‑1糖苷键连接的鼠李糖,能够利用突变体高效转化淫羊藿苷生成淫羊藿次苷I。

    一种双固定化酶联用制备淫羊藿素的方法

    公开(公告)号:CN117247979A

    公开(公告)日:2023-12-19

    申请号:CN202311225587.1

    申请日:2023-09-21

    Abstract: 本发明公开了一种双固定化酶联用制备淫羊藿素的方法,属于酶工程和生物工程技术领域。包括在缓冲体系中,将第一固定化酶与底物淫羊藿总黄酮反应;反应后移除第一固定化酶,并加入第二固定化酶继续反应,得到淫羊藿素;其中,所述第一固定化酶为α‑L‑鼠李糖苷酶DtRha与环氧基树脂载体通过共价键连接得到;所述固定化酶为多功能糖苷酶Tpebgl3由连接肽介导与沸石载体通过特异性吸附连接得到。本发明实现了将淫羊藿总黄酮全部转化为淫羊藿苷元,本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺,提高了生产效率;且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂,降低了环境污染,适宜于工业化生产。

    一种固定化α-L-鼠李糖苷酶及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN117210449A

    公开(公告)日:2023-12-12

    申请号:CN202311263539.1

    申请日:2023-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种固定化α‑L‑鼠李糖苷酶及其制备方法和应用,固定化α‑L‑鼠李糖苷酶包括环氧树脂载体和α‑L‑鼠李糖苷酶,所述α‑L‑鼠李糖苷酶与所述环氧树脂载体通过共价键连接;所述α‑L‑鼠李糖苷酶为粗酶;所述环氧树脂载体为ES‑107T或EG‑1环氧树脂。本发明通过固定化α‑L‑鼠李糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶两个酶的联用,实现直接从淫羊藿总黄酮到淫羊藿苷元的转化,本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺,提高了生产效率;且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂,降低了环境污染,适宜于工业化生产。

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