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公开(公告)号：CN110699394A
公开(公告)日：2020-01-17
申请号：CN201910845471.5
申请日：2019-09-06
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于遗传工程技术领域，涉及一种生产1,5-戊二胺的生物转化法。该方法通过改造对大肠杆菌的代谢途径来提高1,5-戊二胺的产率。具体步骤为所述通过改造大肠杆菌的代谢途径，包括以下步骤：选取大肠杆菌菌株，首先敲除1,5-戊二胺降解路径；其次，增加1,5-戊二胺的合成前体赖氨酸；再次，过表达转运蛋白基因，最后大肠杆菌菌株DFC1002直接发酵生产1,5-戊二胺。该方法通过对大肠杆菌中的代谢路径进行改造后，得到的高产1,5-戊二胺的方法，该方法简单易行，产量高，副产物少，且重复性好，适合产业化。
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公开(公告)号：CN107267472A
公开(公告)日：2017-10-20
申请号：CN201710476350.9
申请日：2017-06-21
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌甲醇代谢途径中限速酶活性的方法，将大肠杆菌过表达基因Mdh和Hps-Phi后，通过添加激活蛋白nudF，增强甲醇脱氢酶的酶活，从而提高甲醇的代谢量；其中，所述基因Mdh和Hps-Phi为来源于甲醇芽孢杆菌MGA3的Mdh2和Hps-Phi；所述激活蛋白nudF来源于E.coli MG1655。本发明在大肠杆菌中进行甲醇代谢路径的组装，实现甲醇代谢，并通过分子手段改造提高甲醇脱氢酶Mdh的酶活，实现了甲醇代谢的提高。
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公开(公告)号：CN108795916B
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201810787121.3
申请日：2018-07-16
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种赖氨酸脱羧酶突变体，它是由氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶通过定点突变得到，为如下(1)和(2)中的任意一种：(1)将氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶的第12位的缬氨酸突变为半胱氨酸，第41位的天冬氨酸突变为半胱氨酸，得到赖氨酸脱羧酶突变体V12C/D41C；(2)将氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶的第89位的亮氨酸突变为半胱氨酸，第442位的亮氨酸突变为半胱氨酸，得到赖氨酸脱羧酶突变体L89C/L442C。本发明提供的赖氨酸脱羧酶突变体其在耐碱及催化性能方面有大幅度提高，更加适合工业化生产需求，满足社会生产的要求。
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公开(公告)号：CN109055449A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201810954086.X
申请日：2018-08-21
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12P13/001
Abstract: 本发明公开了一种利用豆渣水解液发酵生产1,5‑戊二胺的方法，包括以下步骤(1)将豆渣采用复合酶酶解制备豆渣水解液，所述复合酶包括蛋白酶、纤维素酶、果胶酶和淀粉酶；使用所述豆渣水解液、无机氮、无机盐配制发酵培养基；(2)将大肠杆菌活化后接种于步骤(1)配制的发酵培养基中发酵生产1,5‑戊二胺。本专利申请通过酶法处理廉价且产量丰富的豆渣，从而得到含有氨基酸、肽类和葡萄糖等成分的水解液为原料发酵生产1,5‑戊二胺，不仅解决了大豆加工工业废料处理的问题，而且降低了1,5‑戊二胺的生产成本，具有很好的发展前景。
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公开(公告)号：CN110305808B
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN201810947913.2
申请日：2018-08-20
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高耐受1,5‑戊二胺的大肠杆菌，其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)，菌株号为NT1005，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年05月23日，保藏编号为CCTCC NO:M 2018304，还公开了菌株NT1005在发酵生产L‑赖氨酸中的应用。菌株NT1005在含40g/L的1,5‑戊二胺培养基中能正常生长，而同等条件培养的出发菌株基本不生长。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108795916A
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201810787121.3
申请日：2018-07-16
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种赖氨酸脱羧酶突变体，它是由氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶通过定点突变得到，为如下(1)和(2)中的任意一种：(1)将氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶的第12位的缬氨酸突变为半胱氨酸，第41位的天冬氨酸突变为半胱氨酸，得到赖氨酸脱羧酶突变体V12C/D41C；(2)将氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶的第89位的亮氨酸突变为半胱氨酸，第442位的亮氨酸突变为半胱氨酸，得到赖氨酸脱羧酶突变体L89C/L442C。本发明提供的赖氨酸脱羧酶突变体其在耐碱及催化性能方面有大幅度提高，更加适合工业化生产需求，满足社会生产的要求。
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公开(公告)号：CN109082448B
公开(公告)日：2020-04-10
申请号：CN201810947735.3
申请日：2018-08-20
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌，其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)，菌株号为NT1006，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年05月23日，保藏编号为CCTCC NO:M 2018305，还公开了大肠杆菌在发酵生产1,5‑戊二胺中的应用。本发明采用紫外诱变和ARTP诱变相结合，筛选获得一株高产1,5戊二胺的大肠杆菌NT1006：以葡萄糖作为碳源，经过48h的发酵1,5戊二胺产量达到了50g/L，而同等条件培养的出发菌株1,5戊二胺产量仅有12.27g/L。NT1006连续传代7次后发酵液中1,5戊二胺的含量仍维持在50g/L左右，遗传稳定性好。
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公开(公告)号：CN110699394B
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN201910845471.5
申请日：2019-09-06
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于遗传工程技术领域，涉及一种生产1,5‑戊二胺的生物转化法。该方法通过改造对大肠杆菌的代谢途径来提高1,5‑戊二胺的产率。具体步骤为所述通过改造大肠杆菌的代谢途径，包括以下步骤：选取大肠杆菌菌株，首先敲除1,5‑戊二胺降解路径；其次，增加1,5‑戊二胺的合成前体赖氨酸；再次，过表达转运蛋白基因，最后大肠杆菌菌株DFC1002直接发酵生产1,5‑戊二胺。该方法通过对大肠杆菌中的代谢路径进行改造后，得到的高产1,5‑戊二胺的方法，该方法简单易行，产量高，副产物少，且重复性好，适合产业化。
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公开(公告)号：CN107267472B
公开(公告)日：2020-11-10
申请号：CN201710476350.9
申请日：2017-06-21
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌甲醇代谢途径中限速酶活性的方法，将大肠杆菌过表达基因Mdh和Hps‑Phi后，通过添加激活蛋白nudF，增强甲醇脱氢酶的酶活，从而提高甲醇的代谢量；其中，所述基因Mdh和Hps‑Phi为来源于甲醇芽孢杆菌MGA3的Mdh2和Hps‑Phi；所述激活蛋白nudF来源于E.coli MG1655。本发明在大肠杆菌中进行甲醇代谢路径的组装，实现甲醇代谢，并通过分子手段改造提高甲醇脱氢酶Mdh的酶活，实现了甲醇代谢的提高。
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公开(公告)号：CN110305808A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201810947913.2
申请日：2018-08-20
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高耐受1,5-戊二胺的大肠杆菌，其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)，菌株号为NT1005，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年05月23日，保藏编号为CCTCC NO:M 2018304，还公开了菌株NT1005在发酵生产L-赖氨酸中的应用。菌株NT1005在含40g/L的1,5-戊二胺培养基中能正常生长，而同等条件培养的出发菌株基本不生长。
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