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公开(公告)号:CN106834389B
公开(公告)日:2020-03-17
申请号:CN201611142851.5
申请日:2016-12-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株重组菌及其在催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙M2中的应用,所述重组菌中同时含有番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因和马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因,将番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet‑1的NdeI与XhoI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2,然后再将马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet‑SL2的NcoI和EcoRI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1,将重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1转化到宿主细胞中,得到重组菌。将重组菌诱导表达后取粗酶液,加入到反应混合物中催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙M2,反应中使用重组菌破碎后的粗酶液,避免了酶的分离纯化,也无需制作冻干粉,反应液中不需添加直接底物莱鲍迪甙D及UDP或UDP‑葡萄糖和任何细胞通透剂或其他化学试剂,环境友好性更佳。莱鲍迪甙M2的产率高达11.09g/L。
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公开(公告)号:CN106754595B
公开(公告)日:2019-10-22
申请号:CN201611142783.2
申请日:2016-12-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株重组菌及其在催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙D中的应用,所述重组菌中同时含有番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因和马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因,将番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet‑1的NdeI与XhoI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2,然后再将马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet‑SL2的NcoI和EcoRI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1,将重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1转化到宿主细胞中,得到重组菌。将重组菌诱导表达后取粗酶液,加入到反应混合物中催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙D,反应中使用重组菌破碎后的粗酶液,避免了酶的分离纯化,也无需制作冻干粉,反应液中不需添加UDP或UDP‑葡萄糖和任何细胞通透剂或其他化学试剂,环境友好性更佳。莱鲍迪甙D的产率高达10.8 g/L。
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公开(公告)号:CN106834389A
公开(公告)日:2017-06-13
申请号:CN201611142851.5
申请日:2016-12-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株重组菌及其在催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙M2中的应用,所述重组菌中同时含有番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因和马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因,将番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet‑1的NdeI与XhoI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2,然后再将马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet‑SL2的NcoI和EcoRI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1,将重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1转化到宿主细胞中,得到重组菌。将重组菌诱导表达后取粗酶液,加入到反应混合物中催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙M2,反应中使用重组菌破碎后的粗酶液,避免了酶的分离纯化,也无需制作冻干粉,反应液中不需添加直接底物莱鲍迪甙D及UDP或UDP‑葡萄糖和任何细胞通透剂或其他化学试剂,环境友好性更佳。莱鲍迪甙M2的产率高达11.09g/L。
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公开(公告)号:CN106754595A
公开(公告)日:2017-05-31
申请号:CN201611142783.2
申请日:2016-12-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株重组菌及其在催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙D中的应用,所述重组菌中同时含有番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因和马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因,将番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet‑1的NdeI与XhoI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2,然后再将马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet‑SL2的NcoI和EcoRI位点之间,构建得到重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1,将重组质粒pRSFDuet‑SL2‑SUS1转化到宿主细胞中,得到重组菌。将重组菌诱导表达后取粗酶液,加入到反应混合物中催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙D,反应中使用重组菌破碎后的粗酶液,避免了酶的分离纯化,也无需制作冻干粉,反应液中不需添加UDP或UDP‑葡萄糖和任何细胞通透剂或其他化学试剂,环境友好性更佳。莱鲍迪甙D的产率高达10.8 g/L。
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