公开(公告)号：CN109576237A

公开(公告)日：2019-04-05

申请号：CN201910008984.0

申请日：2019-01-04

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 董维亮 ,  吕紫瑶 ,  周杰 ,  徐宁 ,  周鑫海 ,  姜岷

IPC: C12N9/06 ,  C12P7/50 ,  C12P13/00 ,  C12P3/00 ,  C12Q1/32

Abstract: 本发明涉及酶制剂应用技术领域，更具体地，本发明公开了L-谷氨酸氧化酶固体酶制剂及其制备方法。本发明第一个方面提供一种酶制剂的制备方法，包括预处理、预冻、速冻以及真空干燥的步骤；其中，所述酶制剂的制备原料包括保护剂与L-谷氨酸氧化酶液。

公开(公告)号：CN109266664A

公开(公告)日：2019-01-25

申请号：CN201811239155.5

申请日：2018-10-23

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 姜岷 ,  董维亮 ,  吕紫瑶 ,  周杰 ,  周鑫海

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/50 ,  C12Q1/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种融合截短表达策略提高谷氨酸氧化酶稳定性的方法，利用融合截短表达策略，将位于谷氨酸氧化酶的α与β链之间的40个氨基酸残基进行删除，构建了新的重组蛋白(αβγ)2，融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO．1所示，融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因编码的谷氨酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其得到具有相同功能的蛋白质，且重组蛋白的比酶活和稳定性均得到提升。

公开(公告)号：CN110672686B

公开(公告)日：2022-03-08

申请号：CN201910922212.8

申请日：2019-09-27

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 周杰 ,  庄妮莎 ,  吕紫瑶 ,  董维亮 ,  薛瑞 ,  姜岷

IPC: G01N27/30 ,  G01N27/327

Abstract: 本发明涉及谷氨酸传感电极制备领域，更具体地，本发明涉及一种制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法包括：(1)将FeCl3、K3[Fe(CN)6]溶于50mL含有HCl与KCl的溶液中；(2)步骤(1)获得的溶液通氩气8～12min；(3)直径为2mm的裸玻碳电极经氧化铝粉末打磨抛光处理，得到镜面的玻碳电极；(4)+400mV条件下，将步骤(3)获得的电极置于步骤(2)获得的溶液中；(5)以含有HCl与KCl的溶液为电解液，将步骤(4)获得的电极进行活化；(6)将步骤(5)获得的电极在100～110℃干燥55～65min并冷却至室温；(7)将谷氨酸氧化酶与戊二醛溶液混合得到混合液，将混合液滴定于步骤(6)获得的电极上。

公开(公告)号：CN110672686A

公开(公告)日：2020-01-10

申请号：CN201910922212.8

申请日：2019-09-27

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 周杰 ,  庄妮莎 ,  吕紫瑶 ,  董维亮 ,  薛瑞 ,  姜岷

IPC: G01N27/30 ,  G01N27/327

Abstract: 本发明涉及谷氨酸传感电极制备领域，更具体地，本发明涉及一种制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法包括：(1)将FeCl3、K3[Fe(CN)6]溶于50mL含有HCl与KCl的溶液中；(2)步骤(1)获得的溶液通氩气8～12min；(3)直径为2mm的裸玻碳电极经氧化铝粉末打磨抛光处理，得到镜面的玻碳电极；(4)+400mV条件下，将步骤(3)获得的电极置于步骤(2)获得的溶液中；(5)以含有HCl与KCl的溶液为电解液，将步骤(4)获得的电极进行活化；(6)将步骤(5)获得的电极在100～110℃干燥55～65min并冷却至室温；(7)将谷氨酸氧化酶与戊二醛溶液混合得到混合液，将混合液滴定于步骤(6)获得的电极上。

公开(公告)号：CN109266664B

公开(公告)日：2022-02-08

申请号：CN201811239155.5

申请日：2018-10-23

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 姜岷 ,  董维亮 ,  吕紫瑶 ,  周杰 ,  周鑫海

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/50 ,  C12Q1/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种融合截短表达策略提高谷氨酸氧化酶稳定性的方法，利用融合截短表达策略，将位于谷氨酸氧化酶的α与β链之间的40个氨基酸残基进行删除，构建了新的重组蛋白(αβγ)2，融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO．1所示，融合截短表达后的谷氨酸氧化酶基因编码的谷氨酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其得到具有相同功能的蛋白质，且重组蛋白的比酶活和稳定性均得到提升。

公开(公告)号：CN109280653A

公开(公告)日：2019-01-29

申请号：CN201811236340.9

申请日：2018-10-23

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 姜岷 ,  周杰 ,  吕紫瑶 ,  徐宁 ,  周鑫海

IPC: C12N9/06 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种利用多顺反子表达策略制备成熟L-谷氨酸氧化酶的方法。利用多顺反子表达构建含有L－谷氨酸氧化酶α、β、γ链片段序列的重组表达载体pET-Duet－(α+β+γ)，并转化至中E.coli BL21(DE3)并进行抗性筛选：挑取转化子并利用IPTG进行诱导表达，超声破碎细胞后，获得具有六聚体结构的成熟LGOX蛋白（α2β2γ2），本发明利用多顺反子表达策略快速获得成熟的LGOX蛋白，克服了传统利用商业化蛋白酶Sgmp进行酶解制备的产率低、成本高和工艺繁琐等缺点。