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公开(公告)号：CN103993078B
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201410193997.7
申请日：2014-05-09
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及一种可对细胞内端粒酶活性进行原位成像检测的纳米探针及其制备方法。纳米探针以金纳米粒子(AuNP)为载体，负载特殊设计的DNA分子信标(MB)。该MB为茎‑环结构，并带有一个缺口，将整个DNA序列分为两段：较短的一段是端粒酶引物序列(TSP)；较长的一段(1‑MB)含环状结构，其茎部3’端的巯基可共价连接AuNP，5’端修饰荧光分子Cy5。由于荧光共振能量转移，Cy5的荧光被AuNP猝灭，纳米探针的荧光状态为“关”。将探针与细胞温育，探针进入细胞后，在细胞质内端粒酶的作用下，TSP被延长并发生内部链取代，使1‑MB环被打开，导致Cy5离开AuNP表面，将荧光状态转换为“开”，进而利用激光共聚焦荧光显微镜观察Cy5的荧光，可实现细胞内端粒酶活性的原位成像分析。该探针可区分肿瘤和正常细胞，还可用于监测细胞内端粒酶活性在端粒酶抑制药物作用下的变化，因此该发明具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN104250662A
公开(公告)日：2014-12-31
申请号：CN201310256710.6
申请日：2013-06-26
Applicant: 南京大学
CPC classification number: C12Q1/485 , G01N2333/9128
Abstract: 本发明涉及一种原位检测细胞内端粒酶活性的纳米探针及其制备方法。所制得的纳米探针以多孔硅纳米粒子(MSN)为载体，在其孔道中共价固定荧光猝灭剂BHQ、填充荧光素，并通过静电吸附在其表面包裹含端粒酶底物片段(TP)的DNA链O1，将荧光素封堵在孔道中。BHQ的存在猝灭了荧光素的荧光，纳米探针的荧光状态为“关”。在端粒酶的作用下，探针表面O1的3’端被延长，生成多个与5’端互补的TTAGGG片段，导致两端杂交形成环状结构而脱离探针表面，从而打开孔道，释放出探针中的荧光素，使荧光状态转换为“开”。将探针与细胞温育，探针进入细胞质后，在细胞质中端粒酶作用下打开探针孔道，利用释放的荧光素产生的荧光，实现细胞内端粒酶活性的原位检测。
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公开(公告)号：CN103993078A
公开(公告)日：2014-08-20
申请号：CN201410193997.7
申请日：2014-05-09
Applicant: 南京大学
CPC classification number: C12Q1/6818 , C12Q2521/113 , C12Q2543/10 , C12Q2563/137
Abstract: 本发明涉及一种可对细胞内端粒酶活性进行原位成像检测的纳米探针及其制备方法。纳米探针以金纳米粒子(AuNP)为载体，负载特殊设计的DNA分子信标(MB)。该MB为茎-环结构，并带有一个缺口，将整个DNA序列分为两段：较短的一段是端粒酶引物序列(TSP)；较长的一段(1-MB)含环状结构，其茎部3’端的巯基可共价连接AuNP，5’端修饰荧光分子Cy5。由于荧光共振能量转移，Cy5的荧光被AuNP猝灭，纳米探针的荧光状态为“关”。将探针与细胞温育，探针进入细胞后，在细胞质内端粒酶的作用下，TSP被延长并发生内部链取代，使1-MB环被打开，导致Cy5离开AuNP表面，将荧光状态转换为“开”，进而利用激光共聚焦荧光显微镜观察Cy5的荧光，可实现细胞内端粒酶活性的原位成像分析。该探针可区分肿瘤和正常细胞，还可用于监测细胞内端粒酶活性在端粒酶抑制药物作用下的变化，因此该发明具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN104250662B
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201310256710.6
申请日：2013-06-26
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/6841 , C12Q1/48 , G01N21/64
Abstract: 本发明涉及一种原位检测细胞内端粒酶活性的纳米探针及其制备方法。所制得的纳米探针以多孔硅纳米粒子(MSN)为载体，在其孔道中共价固定荧光猝灭剂BHQ、填充荧光素，并通过静电吸附在其表面包裹含端粒酶底物片段(TP)的DNA链O1，将荧光素封堵在孔道中。BHQ的存在猝灭了荧光素的荧光，纳米探针的荧光状态为“关”。在端粒酶的作用下，探针表面O1的3’端被延长，生成多个与5’端互补的TTAGGG片段，导致两端杂交形成环状结构而脱离探针表面，从而打开孔道，释放出探针中的荧光素，使荧光状态转换为“开”。将探针与细胞温育，探针进入细胞质后，在细胞质中端粒酶作用下打开探针孔道，利用释放的荧光素产生的荧光，实现细胞内端粒酶活性的原位检测。
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