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公开(公告)号：CN115960323B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202111189718.6
申请日：2021-10-12
Applicant: 南京大学
IPC: C08F289/00 , C08F220/54 , G01N21/64
Abstract: 本发明涉及一种细胞表面聚糖的可激活型标记方法。利用原子转移自由基聚合(ATRP)技术，在半乳糖氧化酶(GO)表面利用二硫键连接链引发剂，原位可控生长聚合物(PN)，构建聚糖氧化探针GO‑PN。将探针与细胞共温育时，探针上的PN作为物理屏障，使细胞表面聚糖难以接近酶活性中心，GO‑PN无法氧化聚糖末端的半乳糖和N‑乙酰半乳糖胺(Gal/GalNAc)。当向体系中加入还原剂三(2‑羧乙基)膦(TCEP)时，PN和GO之间的二硫键断开使PN解离，探针的酶活性位点得以暴露，氧化细胞表面聚糖的Gal/GalNAc生成醛基。该醛基可进一步与酰肼修饰分子发生高效连接反应，从而实现细胞表面聚糖的可激活型标记。该方法实现了细胞膜聚糖标记的时间控制，为聚糖原位检测和功能研究提供了一种重要的工具。
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公开(公告)号：CN115960324B
公开(公告)日：2025-04-22
申请号：CN202111189720.3
申请日：2021-10-12
Applicant: 南京大学
IPC: C08F289/00 , C08F220/54 , C07K1/13
Abstract: 本发明涉及一种在细胞环境中选择性标记游离糖蛋白的聚糖重构方法。该方法利用聚合物包裹的半乳糖氧化酶(GO)作为聚糖重构探针(GO‑PN)。探针上聚合物对酶活性中心的屏蔽效应随底物尺寸改变而不同。当底物为细胞时，细胞表面锚定的糖复合物(包括糖蛋白、糖脂等)难以接近探针的酶活性中心，因此聚糖重构难以发生；而当底物为游离糖蛋白时，糖蛋白上的糖链可以接近酶活性中心，糖链末端的半乳糖和N‑乙酰半乳糖胺(Gal/GalNAc)被GO氧化生成醛基。基于该原理，探针可在细胞和游离糖蛋白的混合物中选择性重构糖蛋白的聚糖。醛基可进一步与酰肼修饰分子反应，实现细胞环境中游离糖蛋白的聚糖标记。
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公开(公告)号：CN115960324A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202111189720.3
申请日：2021-10-12
Applicant: 南京大学
IPC: C08F289/00 , C08F220/54 , C07K1/13
Abstract: 本发明涉及一种在细胞环境中选择性标记游离糖蛋白的聚糖重构方法。该方法利用聚合物包裹的半乳糖氧化酶(GO)作为聚糖重构探针(GO‑PN)。探针上聚合物对酶活性中心的屏蔽效应随底物尺寸改变而不同。当底物为细胞时，细胞表面锚定的糖复合物(包括糖蛋白、糖脂等)难以接近探针的酶活性中心，因此聚糖重构难以发生；而当底物为游离糖蛋白时，糖蛋白上的糖链可以接近酶活性中心，糖链末端的半乳糖和N‑乙酰半乳糖胺(Gal/GalNAc)被GO氧化生成醛基。基于该原理，探针可在细胞和游离糖蛋白的混合物中选择性重构糖蛋白的聚糖。醛基可进一步与酰肼修饰分子反应，实现细胞环境中游离糖蛋白的聚糖标记。该方法为在复杂生物环境中原位检测游离糖蛋白及其糖基化程度提供了工具，对于发展基于聚糖检测和编辑的临床诊断和活体干预方法具有重要意义。
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公开(公告)号：CN115960323A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202111189718.6
申请日：2021-10-12
Applicant: 南京大学
IPC: C08F289/00 , C08F220/54 , G01N21/64
Abstract: 本发明涉及一种细胞表面聚糖的可激活型标记方法。利用原子转移自由基聚合(ATRP)技术，在半乳糖氧化酶(GO)表面利用二硫键连接链引发剂，原位可控生长聚合物(PN)，构建聚糖氧化探针GO‑PN。将探针与细胞共温育时，探针上的PN作为物理屏障，使细胞表面聚糖难以接近酶活性中心，GO‑PN无法氧化聚糖末端的半乳糖和N‑乙酰半乳糖胺(Gal/GalNAc)。当向体系中加入还原剂三(2‑羧乙基)膦(TCEP)时，PN和GO之间的二硫键断开使PN解离，探针的酶活性位点得以暴露，氧化细胞表面聚糖的Gal/GalNAc生成醛基。该醛基可进一步与酰肼修饰分子发生高效连接反应，从而实现细胞表面聚糖的可激活型标记。该方法实现了细胞膜聚糖标记的时间控制，为聚糖原位检测和功能研究提供了一种重要的工具。
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