公开(公告)号：CN115960160B

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202111189719.0

申请日：2021-10-12

Applicant: 南京大学

Inventor： 丁霖 ,  鞠熀先 ,  李毅然 ,  陈六生

IPC: C07K1/107 ,  C12P19/04 ,  C07K14/47

Abstract: 本发明涉及一种活细胞膜整合素αvβ3聚糖的原位糖链延长方法。通过偶联αvβ3的特异性识别多肽(Pep)和半乳糖氧化酶(GAO)，构建聚糖重构探针Pep‑GAO。在K4[Fe(CN)6]存在下，酶活性被抑制的Pep‑GAO可以结合活细胞表面的整合素αvβ3，然后加入K3[Fe(CN)6]激活GAO，使其氧化αvβ3糖链末端的半乳糖或N‑乙酰半乳糖胺，生成可以发生生物正交反应的醛基。该基团可与酰肼功能化的糖分子发生连接反应，生成腙键，从而实现αvβ3上糖链的延长。该方法在活细胞水平上实现了对特定蛋白聚糖结构的编辑，为细胞膜蛋白聚糖的功能研究和活体聚糖调控提供了有力的工具。

公开(公告)号：CN117554458A

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202210920378.8

申请日：2022-08-03

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  冯楠 ,  李毅然

IPC: G01N27/62

Abstract: 本发明涉及一种活细胞分泌酶的原位质谱检测方法。该方法中，质谱探针由2纳米的金纳米粒子与包含底物多肽及连接多肽(5∶1)的溶液反应，再将DSPE‑PEG‑DBCO接到连接多肽上制得。检测过程首先将质谱探针上的DSPE基团通过10分钟孵育嵌入细胞膜，将其锚定在细胞表面，随后探针上的酶底物多肽快速捕获从细胞内分泌到膜外的酶，用基质辅助激光解吸离子化‑时间飞行质谱(MALDI‑TOF MS)检测细胞表面保留的底物与被剪切的产物，由I产物/(I产物+I底物)获得剪切效率，通过剪切效率与酶浓度的标准曲线，获得分泌酶的量。该策略简单、快速，具有普适性，可用于多种细胞酶分泌的同时定量检测，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN115960160A

公开(公告)日：2023-04-14

申请号：CN202111189719.0

申请日：2021-10-12

Applicant: 南京大学

Inventor： 丁霖 ,  鞠熀先 ,  李毅然 ,  陈六生

IPC: C07K1/107 ,  C12P19/04 ,  C07K14/47

Abstract: 本发明涉及一种活细胞膜整合素αvβ3聚糖的原位糖链延长方法。通过偶联αvβ3的特异性识别多肽(Pep)和半乳糖氧化酶(GAO)，构建聚糖重构探针Pep‑GAO。在K4[Fe(CN)6]存在下，酶活性被抑制的Pep‑GAO可以结合活细胞表面的整合素αvβ3，然后加入K3[Fe(CN)6]激活GAO，使其氧化αvβ3糖链末端的半乳糖或N‑乙酰半乳糖胺，生成可以发生生物正交反应的醛基。该基团可与酰肼功能化的糖分子发生连接反应，生成腙键，从而实现αvβ3上糖链的延长。该方法在活细胞水平上实现了对特定蛋白聚糖结构的编辑，为细胞膜蛋白聚糖的功能研究和活体聚糖调控提供了有力的工具。