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公开(公告)号：CN1844401A
公开(公告)日：2006-10-11
申请号：CN200610037837.9
申请日：2006-01-17
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/63
Abstract: 本发明公开了一种借助于Gateway克隆系统的快速构建基因打靶重组用载体的方法。首先，它用特殊设计的PCR引物进行PCR扩增，得到用于同源重组的5’和3’同源臂，通过BP重组反应分别装入pDONRP4－P1R和pDONRP2R－P3载体中；然后，将目的片段装入我们创造性构建的中间载体pDONR loxP/MCS/loxP－FRT/NEO/FRT中；最后，将以上3种载体与pDEST R4－R3TK载体的混合物在通过1小时快速LR重组反应后，5’同源臂，中间片段，3’同源臂，以及TK负筛选元件便会自动按照设计的顺序拼接，转化并纯化后即得到基因打靶用载体。该方法具有快速、灵活、省时、省力等优点，并突破了传统方法中内切酶位点分布的限制，在基因功能研究方面有重要意义。
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