公开(公告)号：CN118516450A

公开(公告)日：2024-08-20

申请号：CN202410743422.1

申请日：2024-06-11

Applicant: 南京医科大学

Inventor： 王曦 ,  闫环宇 ,  何行思 ,  曾潇 ,  史巧珍 ,  陈诺 ,  盛伟 ,  张瀚文

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明公开了一种针对微量卵母细胞或早期胚胎细胞改良版的ATAC技术。本技术针对微量细胞进行实验开发。生殖细胞起始量在50‑100个，体细胞的数目在500‑1k左右。本发明改良版的ATAC的技术通过简化实验流程，改变孵育条件，利用Tn5酶建库的方法使该技术更加适用于生殖细胞以及微量细胞。改良版的ATAC的结果显示，针对卵母细胞和早期胚胎细胞整体的基因比对率达到80％‑95％，线粒体片段比对率降低至20％‑30％，TSS(转录起始位点)位置中有明显的富集，数据质量有了很大的提升，整体数据质量可以满足分析需求。

公开(公告)号：CN119082000A

公开(公告)日：2024-12-06

申请号：CN202411383508.4

申请日：2024-09-30

Applicant: 南京医科大学

Inventor： 王曦 ,  何行思 ,  闫环宇 ,  曾潇 ,  张瀚文

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明提供了一种改善老龄卵母细胞质量的培养液。该培养液是在卵母细胞体外成熟基础培养液中添加5‑100nM组织型纤溶酶原激活剂。由于组织型纤溶酶原激活剂在体内各个器官组织中液大量表达，这使得该培养液更为安全。该培养液能提高高龄女性卵母细胞的质量和辅助生殖技术的成功率，在应对有生育意愿但促排卵困难的高龄女性的卵母细胞培养上有较好的应用前景。

公开(公告)号：CN119020267A

公开(公告)日：2024-11-26

申请号：CN202411205539.0

申请日：2024-08-30

Applicant: 南京医科大学

Inventor： 王曦 ,  闫环宇 ,  盛伟 ,  王杨敏 ,  史巧珍 ,  何行思 ,  侯舒月 ,  张瀚文

IPC: C12N5/073 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明提供一种构建体外维持小鼠全能性胚胎模型的方法，通过使用剪接体抑制剂PlaB处理早期胚胎，建立一个更接近自然状态的全能性模型，并通过测序技术深入探究全能调控网络和分子机制。具体来说，本发明将PlaB药物稀释至50nM的工作浓度，并应用于不同时段的早期胚胎培养。通过观察和统计胚胎细胞的发育周期和发育比率，使用不同的细胞发育指标进行染色评估，并利用高通量测序技术从转录组数据上评估模型的完整性和全能状态的改变。

公开(公告)号：CN117844905A

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202311699882.0

申请日：2023-12-11

Applicant: 南京医科大学 ,  苏州南医大创新中心

Inventor： 何元林 ,  江玥 ,  王曦

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明涉及一种检测RNA含poly(A)尾的全长的测序文库构建的方法，准备待测样品的总RNA；使所述总RNA在PolyA聚合酶反应体系中进行末端延伸；使所述末端延伸得到的产物不经过RNA纯化，直接在反转录反应体系中进行反转录及模板转换，其中，所述反转录反应体系中含有dCTP、反转录引物以及TSO引物，所述反转录引物的序列中含有分子标签，所述TSO引物的序列中含有分子标签和间隔序列；对产物进行PCR扩增；对扩增后的产物进行测序以获得所述待测样品中具有poly(A)尾的RNA的测序文库。本发明在PCR之前无需纯化RNA，减少微量RNA的损失，使得方法能够适用于微量样品的检测，并且本发明的方法能够提高模板转换效率，减少无效读数的产生，本发明的方法还能够实现转录本的精确定量。