第三代LMP2A CAR-T细胞的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN109384851A

    公开(公告)日:2019-02-26

    申请号:CN201811175668.4

    申请日:2018-10-10

    Abstract: 本发明利用基因工程技术,以具有高亲和力的全人源抗LMP2A Fab为模板,构建靶向LMP2A的嵌合抗原受体的胞外区LMP2A scFv段。重组LMP2A CAR的胞外区LMP2A scFv段与信号肽CD8α、跨膜区CD8TM以及胞内区CD28、CD137、CD3ζ,构建第三代靶向LMP2A的嵌合抗原受体。所制备的靶向LMP2A的嵌合抗原受体经overlap PCR重组于线性化慢病毒载体,构建抗LMP2A CAR的慢病毒表达载体,并制备LMP2A CAR病毒液,感染T细胞获得LMP2A CAR-T细胞,体内外验证其对LMP2A阳性鼻咽癌细胞的特异性靶向杀伤作用,为鼻咽癌治疗提供了新的治疗思路与手段。

    抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用

    公开(公告)号:CN101397342B

    公开(公告)日:2013-01-30

    申请号:CN200810156947.6

    申请日:2008-09-19

    CPC classification number: Y02A50/423

    Abstract: 本发明抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及制备血吸虫病治疗药物领域。应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单抗NP11-4,利用基因工程技术提取杂交瘤细胞株总RNA,RT-PCR方法扩增VH、VL基因,将鼠源VH、VL分别与人IgG1的CH1、CL通过PCR扩增Fd及全长L,再利用重叠延伸PCR以Fd和L基因为模板扩增嵌合Fab基因,将嵌合Fab基因与载体pComb3XSS酶切、连接,克隆至大肠杆菌Top10F’,诱导目的蛋白可溶性表达。表达的抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4嵌合Fab抗体N端从第1个氨基酸到第215个氨基酸为嵌合Fab抗体的L链,从第216个氨基酸到第488个氨基酸为嵌合Fab抗体的Fd段,两者之间由二硫键相连,嵌合Fab抗体全长488个氨基酸。

    一种大别班达病毒mRNA疫苗及其制备方法

    公开(公告)号:CN117771352B

    公开(公告)日:2024-06-21

    申请号:CN202311792309.4

    申请日:2023-12-25

    Abstract: 本发明涉及生物制药技术领域,具体涉及一种大别班达病毒mRNA疫苗及其制备方法。本发明提供的mRNA分子为优化的大别班达病毒糖蛋白Gn序列,并克隆至pGEM‑3Zf(+)mRNA疫苗载体上,质粒经酶切线性化,体外转录酶法加帽和添加poly(A)尾制备获得mRNA;将获得的mRNA转染真核细胞,经免疫印迹实验证实其可进行体外表达;mRNA经脂质纳米颗粒递送系统包封后获得mRNA疫苗,免疫小鼠后可以诱导产生较高的血清抗体水平,病毒中和试验进一步证实免疫血清能够与病毒结合,阻止病毒感染细胞。本发明制备的大别班达病毒mRNA疫苗可为大别班达病毒感染的预防提供候选疫苗。

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