一种改良的农杆菌介导大豆整体转化方法

    公开(公告)号:CN108374020A

    公开(公告)日:2018-08-07

    申请号:CN201810194837.2

    申请日:2018-03-09

    Abstract: 本发明公开了一种改良的农杆菌介导大豆整体转化方法,是将含有外源DNA的质粒导入根癌农杆菌中,得到重组农杆菌,将所得到的重组农杆菌用如下溶液进行悬浮后,通过自制的工具,在大豆开花的当天下午3~4点对大豆的子房壁进行针扎和注射处理,进行遗传转化:溶剂为水,溶质是非离子表面活性剂Sillwet L-77,蔗糖和乙酰丁香酮;其中,Sillwet L-77的体积百分比浓度为0.1%-0.3%,蔗糖的质量百分比浓度为5%,乙酰丁香酮的质量百分比浓度为0.003%。利用本方法将一个大豆热激蛋白90合成相关的基因导入大豆植株中,获得转基因大豆植株。

    一种高效率农杆菌介导大豆根毛转化方法

    公开(公告)号:CN109385446B

    公开(公告)日:2022-01-04

    申请号:CN201710692347.0

    申请日:2017-08-14

    Abstract: 本发明公开一种高效率农杆菌介导大豆根毛转化方法,包括如下步骤:1)获得携带目的基因的发根农杆菌菌苔,利用液体共培养培养基悬浮菌苔,调节OD600值在0.6~1.0;2)将在萌发培养基中萌发的大豆种子沿种脐剖开获得半种子,将半种子放入步骤1)制备的含有悬浮菌苔的液体共培养培养基中,侵染15~30min;3)步骤2)侵染后的半种子布于空培养容器中,23~25℃黑暗共培养3~5天;4)步骤3)共培养后的半种子切去根部,布于培养基中,23~25℃黑暗培养,长出根后,选取长度为4~6cm的阳性根切下单独培养。本发明所述方法操作时间短,简单高效,发根率高,阳性率高;且外植体不容易被农杆菌和其他杂菌污染。

    一种高效率农杆菌介导大豆根毛转化方法

    公开(公告)号:CN109385446A

    公开(公告)日:2019-02-26

    申请号:CN201710692347.0

    申请日:2017-08-14

    Abstract: 本发明公开一种高效率农杆菌介导大豆根毛转化方法,包括如下步骤:1)获得携带目的基因的发根农杆菌菌苔,利用液体共培养培养基悬浮菌苔,调节OD600值在0.6~1.0;2)将在萌发培养基中萌发的大豆种子沿种脐剖开获得半种子,将半种子放入步骤1)制备的含有悬浮菌苔的液体共培养培养基中,侵染15~30min;3)步骤2)侵染后的半种子布于空培养容器中,23~25℃黑暗共培养3~5天;4)步骤3)共培养后的半种子切去根部,布于培养基中,23~25℃黑暗培养,长出根后,选取长度为4~6cm的阳性根切下单独培养。本发明所述方法操作时间短,简单高效,发根率高,阳性率高;且外植体不容易被农杆菌和其他杂菌污染。

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