公开(公告)号：CN107299059B

公开(公告)日：2020-08-25

申请号：CN201710722891.5

申请日：2017-08-22

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王长海 ,  何梅琳 ,  颜永全 ,  宋虹 ,  顾传坤

IPC: C12N1/12 ,  C12N13/00 ,  C12R1/89

Abstract: 本发明公开了一种斜生栅藻原生质体制备的方法，收集培养至对数生长期的斜生栅藻藻液，用超声波振荡器振荡，离心收集斜生栅藻细胞，用BG11培养基重悬得到斜生栅藻细胞悬液；采用从大型溞中提取的混合消化酶液，加入少量纤维素酶、果胶酶和高渗溶剂甘露醇和膜稳定剂CaCl2，与斜生栅藻细胞悬液混合，酶解消化斜生栅藻的细胞壁，获取原生质体。本发明方法应用的大型溞混合消化酶活力高，能在短时间，温和的条件下酶解斜生栅藻的细胞壁。通过该方法制备原生质体的效率可达70％，且原生质体活性较强，再生能力强。本发明为以斜生栅藻为目标的细胞融合及基因操作提供技术支持，亦可为研究微藻细胞的内吞作用提供可靠的原材料。

公开(公告)号：CN107299059A

公开(公告)日：2017-10-27

申请号：CN201710722891.5

申请日：2017-08-22

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王长海 ,  何梅琳 ,  颜永全 ,  宋虹 ,  顾传坤

IPC: C12N1/12 ,  C12N13/00 ,  C12R1/89

Abstract: 本发明公开了一种斜生栅藻原生质体制备的方法，收集培养至对数生长期的斜生栅藻藻液，用超声波振荡器振荡，离心收集斜生栅藻细胞，用BG11培养基重悬得到斜生栅藻细胞悬液；采用从大型溞中提取的混合消化酶液，加入少量纤维素酶、果胶酶和高渗溶剂甘露醇和膜稳定剂CaCl2，与斜生栅藻细胞悬液混合，酶解消化斜生栅藻的细胞壁，获取原生质体。本发明方法应用的大型溞混合消化酶活力高，能在短时间，温和的条件下酶解斜生栅藻的细胞壁。通过该方法制备原生质体的效率可达70％，且原生质体活性较强，再生能力强。本发明为以斜生栅藻为目标的细胞融合及基因操作提供技术支持，亦可为研究微藻细胞的内吞作用提供可靠的原材料。