公开(公告)号：CN117384925A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202211510854.5

申请日：2022-11-29

Applicant: 南京农业大学 ,  江苏省农业科学院

Inventor： 刘永杰 ,  耿金柱 ,  董雨豪 ,  谢星 ,  冯志新 ,  宋錞燮

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/11 ,  C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种双荧光素报告IFN‑β启动子活性慢病毒质粒、报告细胞系及构建方法，本发明以plvx质粒为骨架通过引入Gluc分泌性荧光素酶基因作为报告基因，并且在该基因的下游反向串联Luc基因作为内参基因以归一化实验结果，合成了用于报告IFN‑β启动子活性的DNA片段组合物、构建了pIFNβ活性双荧光素酶报告系统稳转细胞系。本发明不仅解决了因为转染不同质粒的效率和细胞状态带来的实验差异，同时将分泌性荧光素酶报告基因和慢病毒包装系统结合使得整套系统更加适合高通量持续性实验的检测。

公开(公告)号：CN117165616A

公开(公告)日：2023-12-05

申请号：CN202310924840.6

申请日：2023-07-26

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘永杰 ,  耿金柱 ,  范志明 ,  董雨豪 ,  黄昊

IPC: C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明提供一种乳酸菌组成型异源蛋白高表达表面展示质粒系统及应用，通过设计4种表达盒序列，构建了相应的质粒载体，筛选得到一种可以显著提高外源表达蛋白产量乳酸菌‑大肠杆菌穿梭质粒系统pHC，并且该质粒表达系统可以在乳酸乳球菌内实现外源蛋白分泌表达。然而对于杆菌只能在细胞内表达，无法分泌到培养基中以及在细菌细胞壁表面表达，进而对其进行进一步改造，在表达盒的N端引入可替换式LPXTG motif(LPQTG)基序获得pHCL质粒表达系统，该质粒表达系统可在宿主菌的内源性分选酶作用下将外源蛋白展示到细胞壁表面。此外该质粒表达系统可以根据宿主菌分选酶识别LPXTG基序特异性，通过分子生物学手段替换不同的LPXTG基序以实现异源蛋白表面展示效果最大化。