公开(公告)号：CN117050190A

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202311020992.X

申请日：2023-08-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  纪晓霞 ,  马畅 ,  张亚峰

IPC: C07K16/40 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  G01N33/573

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种单克隆抗体。该单克隆抗体可结合血管紧张素转换酶2(ACE2)蛋白。抗体效价为1∶512000，应用鼠抗鸡ACE2单克隆抗体可成功特异性结合鸡ACE2蛋白。本发明中的抗原和单克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2作为RAS系统的负调节分子，通过靶向降解AngII，发挥抗损伤、抗纤维化等机体保护功能；作为急性严重呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)主要功能性受体，具有保护肺损伤的功能；ACE2协同氨基酸转运载体转运，与氨基酸吸收不良、肠道微生态平衡和胃肠道炎症发挥重要作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

公开(公告)号：CN115725506A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202111023466.X

申请日：2021-09-01

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  闫书平 ,  纪晓霞 ,  谢娜娜 ,  朱斌

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/55 ,  C12N15/867 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明提供了大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)过表达ACE2细胞株的构建。包括ACE2载体制备、慢病毒包装、单克隆细胞株筛选及过表达鉴定等。建立了可稳定过表达血管紧张素转化酶2(angiotensin‑converting enzyme 2，ACE2)基因的细胞株，并能稳定传代；并对其进行Western blot验证。结果证实过表达的细胞株已经成功将慢病毒携带的ACE2基因整合至大鼠MSC中，且能在MSC中过量稳定表达，ACE2自发现以来，在其抗炎方面的研究报道较多，但在MSC中的研究报道较少，且ACE2联合MSC在抗炎方面的研究几乎未见报道，本发明基于MSC、慢病毒包装等技术首次成功构建出的MSC过表达ACE2稳定株，对ACE2在在各种炎症性疾病的研究及治疗提供了高价值的生物学材料；对包括冠状病毒在内的多种病原所致的炎症性病变的研究具有重要的生物学意义。

公开(公告)号：CN113122523A

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN202010049866.7

申请日：2020-01-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  纪晓霞 ,  李帅 ,  李志强 ,  姜婉茹 ,  闫书平 ,  朱斌

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70 ,  C07K16/40 ,  C07K16/06

Abstract: 本发明提供了鸡ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列，构建了ACE2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ACE2蛋白，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体，并且本发明中的抗原和多克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2作为RAS系统的负调节分子，通过靶向降解AngII，发挥抗损伤、抗纤维化等机体保护功能；作为急性严重呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)主要功能性受体，具有保护肺损伤的功能；ACE2协同氨基酸转运载体转运，与氨基酸吸收不良、肠道微生态平衡和胃肠道炎症发挥重要作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

公开(公告)号：CN113121695A

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN202010047410.7

申请日：2020-01-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李帅 ,  纪晓霞 ,  王换换 ,  闫书平 ,  姜婉茹 ,  李志强

IPC: C07K16/40 ,  C07K16/06 ,  C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供了麻鸭ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列，麻鸭ACE2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ACE2蛋白，并对蛋白进行纯化，纯化后的蛋白制备效价较高的多克隆抗体，经测定后该抗体效价为1∶1600，可以用于相关实验。

公开(公告)号：CN116027037A

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202111251060.7

申请日：2021-10-26

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  纪晓霞 ,  陈雨涛 ,  曹西月 ,  张崇昊

IPC: G01N33/573 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543

Abstract: 针对目前尚无检测禽类ACE2检测试剂盒的现状，本发明涉及一种鸡ACE2双抗体夹心ELISA检测试剂盒及检测方法，试剂盒包括：包被有抗鸡ACE2蛋白多克隆抗体的酶标板、封闭液、HRP标记兔抗鸡ACE2多克隆抗体、浓缩洗涤液、显色液、终止液、标准品。本发明鸡ACE2双抗体夹心ELISA检测周期短、操作简便、灵敏度高、特异性强，设备要求简单，能定量分析，且试剂盒可以实现大批量样本的快速检测。ACE2作为RAS系统负调节分子，可降解AngII，发挥抗损伤、抗纤维化等机体保护功能；作为SARS‑CoV‑2功能性受体，具有保护肺损伤的功能；ACE2协同氨基酸转运载体转运，与胃肠道炎症发挥重要作用，因此ACE2含量的微小变化会直接或间接影响动物机体的健康。所以本发明为ACE2的定量提供一种可供选择的检测方法。

公开(公告)号：CN115725505A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202111023250.3

申请日：2021-09-01

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李志强 ,  张崇昊 ,  纪晓霞 ,  曹西月 ,  闫书平 ,  谢娜娜

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/57

Abstract: 本发明提供一株IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株的细胞系及构建方法，包括ACE2基因敲除载体设计、制备、慢病毒包装、单克隆株筛选及敲除分析等并获得ACE2基因敲除稳定细胞系。ACE2在抗炎及纤维化、肠道物质吸收转运及作为SARS‑CoV和SARS‑CoV‑2的功能性受体，调控ACE2对机体健康意义重大。目前未有商品化IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株，在一定程度上限制ACE2在猪肠道健康领域的研究。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建出IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株，为在动物尤其在猪上的研究提供高价值的生物材料，对猪肠道健康的研究具有重要的生物学意义。

公开(公告)号：CN115308410A

公开(公告)日：2022-11-08

申请号：CN202110492509.2

申请日：2021-05-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李帅 ,  谢娜娜 ,  纪晓霞 ,  朱斌 ,  张崇昊

IPC: G01N33/573 ,  G01N33/543 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及一种鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA快速检测试剂盒以及对鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)检测方法。本发明具有定量、检测浓度范围大、重复性好、操作简便等优点。

公开(公告)号：CN112501200A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011135191.4

申请日：2020-10-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 纪晓霞 ,  张源淑 ,  王换换 ,  李帅 ,  李志强 ,  曹西月

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种鸡ACE2真核表达重组质粒载体的构建、鉴定与表达方法，包括构建ACE2真核表达载体，转染CHO细胞，筛选稳定表达的pcDNA.3.1(+)‑ACE2细胞株，获得具有生物学活性的ACE2蛋白并测定酶活。本发明具有：①快速：仅需要1小时②简单：无需酶切③高效：阳性率达95％以上④无缝：不引入额外序列等优点。ACE2具有抗炎、抗损伤、抗纤维化等机体保护功能，特别作为SARS‑CoV和SARS‑CoV‑2主要功能性受体，具有保护肺损伤功能。目前缺乏生物活性的鸡ACE2蛋白，限制了其生物学功能的研究。本发明为深入研究鸡ACE2作为病毒受体在禽冠状病毒感染中发挥的生物学功能及其分子机制，开发以ACE2为冠状病毒靶向治疗药物奠定基础。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用的意义都是十分重大的。