公开(公告)号：CN119242630A

公开(公告)日：2025-01-03

申请号：CN202411089373.0

申请日：2024-08-09

Applicant: 华南理工大学 ,  张浩楠

Inventor： 张浩楠 ,  方颖 ,  吴建华 ,  李趣欢 ,  黄黎珍 ,  王和风 ,  黄冬超 ,  钟配文 ,  罗咏琪

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明提供了一种构建表达moesin‑EGFP的MDA‑MB‑231细胞株的方法。通过设计靶向moesin基因终止子区域的sgRNA，并构建含有LHA、Linker、EGFP和RHA序列的Donor质粒，该质粒在moesin蛋白和EGFP蛋白之间加入连接序列，以避免EGFP影响moesin蛋白功能。利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，将sgRNA、Cas9蛋白和线性化Donor质粒共同转入MDA‑MB‑231细胞。通过流式细胞术分选出表达moesin‑EGFP的纯合子细胞，并通过PCR和Western blot验证基因编辑和蛋白表达情况。该方法实现了moesin‑EGFP融合蛋白的稳定表达，达到实时监测细胞中内源性moesin表达的目的。该细胞株可用于研究moesin在细胞迁移和信号传导中的功能，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN119614511A

公开(公告)日：2025-03-14

申请号：CN202411885785.5

申请日：2024-12-20

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 罗咏琪 ,  王和风 ,  吴建华 ,  方颖

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/87 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/02 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了一种改造HL60细胞的构建方法及其应用。本发明通过电转杯和电转针重复利用，并搭配SBB缓冲液，能成功地将外源物质转染到HL60细胞中，并摸索得到最适宜HL60细胞电转染的参数。因此该构建方法不仅解决了HL60难以转染的问题，而且成本低。依据该构建方法，能制备基于研究急性髓性白血病的改造HL60细胞株。本发明成功构建了敲除CD44和/或PSGL‑1的HL60细胞株，能用于研究内皮选择素配体。