公开(公告)号：CN114808147A

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202210082569.1

申请日：2022-01-24

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 王弘 ,  刘飞 ,  张奇 ,  李迎雪

IPC: C40B50/06 ,  C40B40/10 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C07K16/00

Abstract: 本发明公开了一种纳米抗体合成库及其构建方法。本发明的构建方法是选择一种高表达量及高热稳定性纳米抗体骨架区作为合成库的基础抗体框架，再通过纳米抗体序列收集，数据统计分析，确定了随机化区域，随机化策略采用NNK简并密码子引入序列多样性，通过Klenow酶扩增合成片段，以及多次重叠延伸拼接后得到完整的含随机化位点的纳米抗体序列，用于构建高容量、高多样性的纳米抗体合成库。其中，所述框架的表达量大于20mg/L，热稳定性指在50～90℃下加热5～60min仍可维持同室温相近的活性；设计三种长度的CDR3区，并对三个CDR区都进行随机化，最终构建了三种长度不同的纳米抗体合成库，增加文库的序列多样性和结构多样性。

公开(公告)号：CN114381472B

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202111661215.4

申请日：2021-12-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王弘 ,  李迎雪 ,  刘飞 ,  徐振林

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B40/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种纳米抗体全合成文库及其构建方法。本发明的构建方法包括如下步骤：S1.选择一个固定的抗体恒定区序列作为骨架，统计分析已报道的纳米抗体序列，确定CDRs区氨基酸长度；S2.随后根据CDRs区氨基酸使用频率高低，确定CDR1和CDR2区氨基酸随机化数目，对CDR3区设计3种长度的氨基酸随机化数目，随后对3个CDR区均进行NNK随机化；S3.利用重叠延伸PCR获得完整DNA片段并克隆至载体，转化至大肠杆菌，构建纳米抗体全合成文库。本发明的构建方法可控性强，设计灵活，构建的纳米抗体全合成文库库容量大，多样性丰富，可用作不同抗原的筛选平台，丰富纳米抗体全合成文库资源。

公开(公告)号：CN114381472A

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN202111661215.4

申请日：2021-12-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王弘 ,  李迎雪 ,  刘飞 ,  徐振林

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C40B40/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种纳米抗体全合成文库及其构建方法。本发明的构建方法包括如下步骤：S1.选择一个固定的抗体恒定区序列作为骨架，统计分析已报道的纳米抗体序列，确定CDRs区氨基酸长度；S2.随后根据CDRs区氨基酸使用频率高低，确定CDR1和CDR2区氨基酸随机化数目，对CDR3区设计3种长度的氨基酸随机化数目，随后对3个CDR区均进行NNK随机化；S3.利用重叠延伸PCR获得完整DNA片段并克隆至载体，转化至大肠杆菌，构建纳米抗体全合成文库。本发明的构建方法可控性强，设计灵活，构建的纳米抗体全合成文库库容量大，多样性丰富，可用作不同抗原的筛选平台，丰富纳米抗体全合成文库资源。