公开(公告)号：CN109536432A

公开(公告)日：2019-03-29

申请号：CN201811162769.8

申请日：2018-09-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  李云锋 ,  黄嘉瑶 ,  冷梅钦 ,  王振中 ,  李华平

IPC: C12N3/00 ,  C07K14/37 ,  C07K1/34 ,  C12P21/00 ,  G01N33/68 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种稻瘟菌分泌蛋白的提取方法及应用shotgun技术研究其分泌蛋白质组的方法，包括以下步骤：S1.稻瘟菌分生孢子的培养：将稻瘟菌菌丝接种至PDA培养基中进行培养；向培养基中加入无菌水，捣碎菌丝，转至西红柿燕麦培养基中，涂抹均匀，28℃下光照培养2～4d；将培养基表面菌丝打断，再加入无菌水，洗去培养基表面菌丝，28℃下光照培养2～4d进行产孢；加入无菌水进行冲洗，收集分生孢子，过滤后得到浓缩的稻瘟菌分生孢子悬浮液；S2.采用超滤法制备稻瘟菌分生孢子分泌蛋白。本发明通过优化稻瘟菌分生孢子的培养和分泌蛋白的诱导提取步骤，避免了复杂的样品前处理过程；并应用shotgun技术，高通量分析鉴定了稻瘟菌分泌蛋白；本发明对于探究稻瘟菌的致病机理有重要意义。

公开(公告)号：CN109536432B

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN201811162769.8

申请日：2018-09-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  李云锋 ,  黄嘉瑶 ,  冷梅钦 ,  王振中 ,  李华平

IPC: C12N3/00 ,  C07K14/37 ,  C07K1/34 ,  C12P21/00 ,  G01N33/68 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种稻瘟菌分泌蛋白的提取方法及应用shotgun技术研究其分泌蛋白质组的方法，包括以下步骤：S1.稻瘟菌分生孢子的培养：将稻瘟菌菌丝接种至PDA培养基中进行培养；向培养基中加入无菌水，捣碎菌丝，转至西红柿燕麦培养基中，涂抹均匀，28℃下光照培养2～4d；将培养基表面菌丝打断，再加入无菌水，洗去培养基表面菌丝，28℃下光照培养2～4d进行产孢；加入无菌水进行冲洗，收集分生孢子，过滤后得到浓缩的稻瘟菌分生孢子悬浮液；S2.采用超滤法制备稻瘟菌分生孢子分泌蛋白。本发明通过优化稻瘟菌分生孢子的培养和分泌蛋白的诱导提取步骤，避免了复杂的样品前处理过程；并应用shotgun技术，高通量分析鉴定了稻瘟菌分泌蛋白；本发明对于探究稻瘟菌的致病机理有重要意义。