公开(公告)号：CN116254284A

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN202310081742.0

申请日：2023-01-17

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 熊文广 ,  常依 ,  曾振灵 ,  万鹏 ,  谢龙飞 ,  张旭财

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/64 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/31

Abstract: 本发明公开了一种pCasRA质粒，所述pCasRA质粒的核苷酸信息如SEQ ID NO：1所示。所述pCasRA质粒以pCas9质粒作为载体骨架，在载体骨架上接入接合转移位点oriT、pRA0726质粒的复制子和头孢西丁抗性基因，并将pCas9质粒中的crRNA部分替换成Cas9蛋白基因(SEQ ID NO：20)和整合型sgRNA(SEQ ID NO：7)的连接产物。本发明所述pCasRA质粒能够在大肠杆菌中通过接合转移到鸭疫里氏杆菌中，并且该pCasRA质粒能够在鸭疫里氏杆菌中稳定表达Cas9蛋白基因，进行基因组DNA编辑，实现基因敲除和/或单碱基突变。

公开(公告)号：CN115029459A

公开(公告)日：2022-09-09

申请号：CN202210778136.X

申请日：2022-06-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 曾振灵 ,  郝杰 ,  谢龙飞 ,  熊文广 ,  曾东平 ,  刘雅红

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a可视化检测多杀性巴氏杆菌的试剂盒及方法，所述试剂盒通过先对待测样品进行扩增，接着在crRNA引导序列的介导下，引导CRISPR‑Cas12a体系对RPA扩增产物进行识别结合并切割目标双链DNA激活非特异性核酸酶功能，然后任意切割体系中的ssDNA荧光探针得到切割产物并进行显色检测判断。本发明所述的试剂盒针对多杀性巴氏杆菌核酸的检测灵敏度可达2拷贝/μL，且可选用RPA进行扩增，全程在37℃环境下进行，裸眼可直接观察，实现了脱离实验室大型仪器的依赖、实现现场快速可视化检测靶标核酸的目的。

公开(公告)号：CN116254284B

公开(公告)日：2025-01-28

申请号：CN202310081742.0

申请日：2023-01-17

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 熊文广 ,  常依 ,  曾振灵 ,  万鹏 ,  谢龙飞 ,  张旭财

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/64 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/31

Abstract: 本发明公开了一种pCasRA质粒，所述pCasRA质粒的核苷酸信息如SEQ ID NO：1所示。所述pCasRA质粒以pCas9质粒作为载体骨架，在载体骨架上接入接合转移位点oriT、pRA0726质粒的复制子和头孢西丁抗性基因，并将pCas9质粒中的crRNA部分替换成Cas9蛋白基因(SEQ ID NO：20)和整合型sgRNA(SEQ ID NO：7)的连接产物。本发明所述pCasRA质粒能够在大肠杆菌中通过接合转移到鸭疫里氏杆菌中，并且该pCasRA质粒能够在鸭疫里氏杆菌中稳定表达Cas9蛋白基因，进行基因组DNA编辑，实现基因敲除和/或单碱基突变。

公开(公告)号：CN115094122A

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN202210744634.2

申请日：2022-06-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 熊文广 ,  谢龙飞 ,  李燕红 ,  郝杰

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/689 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a可视化检测鸭疫里氏杆菌的试剂盒及其应用，所述试剂盒包含特异性crRNA、鸭疫里氏杆菌特异性RPA引物对和探针，所述特异性crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述特异性RPA引物对的上游引物RPA‑F、下游引物RPA‑R和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：3～5所示；探针5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。所述试剂盒具有成本低，操作便捷、耗时少、灵敏度高和特异性强等特点，全程在37～40℃环境下进行，可以有效脱离实验室大型仪器的依赖。