公开(公告)号：CN116254284A

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN202310081742.0

申请日：2023-01-17

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 熊文广 ,  常依 ,  曾振灵 ,  万鹏 ,  谢龙飞 ,  张旭财

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/64 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/31

Abstract: 本发明公开了一种pCasRA质粒，所述pCasRA质粒的核苷酸信息如SEQ ID NO：1所示。所述pCasRA质粒以pCas9质粒作为载体骨架，在载体骨架上接入接合转移位点oriT、pRA0726质粒的复制子和头孢西丁抗性基因，并将pCas9质粒中的crRNA部分替换成Cas9蛋白基因(SEQ ID NO：20)和整合型sgRNA(SEQ ID NO：7)的连接产物。本发明所述pCasRA质粒能够在大肠杆菌中通过接合转移到鸭疫里氏杆菌中，并且该pCasRA质粒能够在鸭疫里氏杆菌中稳定表达Cas9蛋白基因，进行基因组DNA编辑，实现基因敲除和/或单碱基突变。

公开(公告)号：CN116254284B

公开(公告)日：2025-01-28

申请号：CN202310081742.0

申请日：2023-01-17

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 熊文广 ,  常依 ,  曾振灵 ,  万鹏 ,  谢龙飞 ,  张旭财

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/64 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N15/31

Abstract: 本发明公开了一种pCasRA质粒，所述pCasRA质粒的核苷酸信息如SEQ ID NO：1所示。所述pCasRA质粒以pCas9质粒作为载体骨架，在载体骨架上接入接合转移位点oriT、pRA0726质粒的复制子和头孢西丁抗性基因，并将pCas9质粒中的crRNA部分替换成Cas9蛋白基因(SEQ ID NO：20)和整合型sgRNA(SEQ ID NO：7)的连接产物。本发明所述pCasRA质粒能够在大肠杆菌中通过接合转移到鸭疫里氏杆菌中，并且该pCasRA质粒能够在鸭疫里氏杆菌中稳定表达Cas9蛋白基因，进行基因组DNA编辑，实现基因敲除和/或单碱基突变。