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公开(公告)号：CN105524893B
公开(公告)日：2019-01-08
申请号：CN201610029794.3
申请日：2016-01-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166H及其应用。所述的突变酶D166H是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp改变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：6。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了11倍，大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时，为降低生产成本，本发明寻找了7种新型酰基供体，突变酶均能高效利用乙酸乙烯酯、乙酸戊酯和乙酸异丙烯酯，其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了74倍，能作为替代昂贵的乙酰辅酶A底物用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止，在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中，并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。
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公开(公告)号：CN105602916A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610031523.1
申请日：2016-01-15
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12N9/1029 , C12P17/02 , C12Y203/01167
Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶R363H及其应用。所述的突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第363位氨基酸由Arg改变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：14。本发明成功构建出突变酶R363H。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了12倍，大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时，为降低生产成本，本发明寻找了7种新型酰基供体，突变酶均能高效利用这些酰基供体，其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了100倍，能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止，在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中，并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。
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公开(公告)号：CN103114102A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201310034775.6
申请日：2013-01-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多基因载体组装方法与应用，属于基因工程技术领域。该方法包括如下步骤（1）采用含有酶切位点的重叠引物对三个基因片段进行PCR扩增，通过1.33×连接buffer将三个片段连接成重组质粒；（2）重组质粒含有单一酶切位点，在每个插入基因对应的重叠引物内加上质粒单一酶切位点末端碱基，将重组质粒用相应的酶进行酶切，依次用1.33×连接buffer将重组质粒酶切片段和PCR扩增片段连接成新的重组质粒。（1）中引入的多个酶切位点，可以为后续的多基因酶切连接做基础；（2）不仅可以减少质粒单酶切后自连以及目的基因反向连接，而且只需要一个合适的酶切位点，就可以连接所有的目的基因片段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105602916B
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201610031523.1
申请日：2016-01-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶R363H及其应用。所述的突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第363位氨基酸由Arg改变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：14。本发明成功构建出突变酶R363H。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了12倍，大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时，为降低生产成本，本发明寻找了7种新型酰基供体，突变酶均能高效利用这些酰基供体，其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了100倍，能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止，在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中，并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。
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公开(公告)号：CN105524893A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201610029794.3
申请日：2016-01-15
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12N9/1029 , C12P17/02 , C12Y203/01
Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166H及其应用。所述的突变酶D166H是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp改变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：6。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了11倍，大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时，为降低生产成本，本发明寻找了7种新型酰基供体，突变酶均能高效利用乙酸乙烯酯、乙酸戊酯和乙酸异丙烯酯，其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了74倍，能作为替代昂贵的乙酰辅酶A底物用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止，在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中，并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。
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公开(公告)号：CN105524892B
公开(公告)日：2019-01-08
申请号：CN201610028306.7
申请日：2016-01-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166HR363H及其应用。该突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp变为His，第363位氨基酸由Arg变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：8。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了39倍，大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时，为降低生产成本，本发明寻找了7种廉价的酰基供体，突变酶均能高效利用这些酰基供体，其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了143倍，能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止，在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中，并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。
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公开(公告)号：CN105524892A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201610028306.7
申请日：2016-01-15
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12N9/1029 , C12N2800/101 , C12P17/02
Abstract: 本发明公开一种DBAT突变酶D166HR363H及其应用。该突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp变为His，第363位氨基酸由Arg变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：8。该突变酶在利用乙酰辅酶A的催化效率上比野生型酶提高了39倍，大大提高了乙酰辅酶A的使用率和产物巴卡亭Ⅲ的产量。同时，为降低生产成本，本发明寻找了7种廉价的酰基供体，突变酶均能高效利用这些酰基供体，其中对乙酸乙烯酯的利用率提高了143倍，能作为替代昂贵的乙酰辅酶A用于制备巴卡亭Ⅲ。迄今为止，在生物合成巴卡亭Ⅲ的研究中，并未发现有以非植物辅酶类为酰基供体并体现高利用率的研究。
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公开(公告)号：CN103114102B
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201310034775.6
申请日：2013-01-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多基因载体组装方法与应用，属于基因工程技术领域。该方法包括如下步骤（1）采用含有酶切位点的重叠引物对三个基因片段进行PCR扩增，通过1.33×连接buffer将三个片段连接成重组质粒；（2）重组质粒含有单一酶切位点，在每个插入基因对应的重叠引物内加上质粒单一酶切位点末端碱基，将重组质粒用相应的酶进行酶切，依次用1.33×连接buffer将重组质粒酶切片段和PCR扩增片段连接成新的重组质粒。（1）中引入的多个酶切位点，可以为后续的多基因酶切连接做基础；（2）不仅可以减少质粒单酶切后自连以及目的基因反向连接，而且只需要一个合适的酶切位点，就可以连接所有的目的基因片段。
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