公开(公告)号：CN109735604A

公开(公告)日：2019-05-10

申请号：CN201811584939.1

申请日：2018-12-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王丽 ,  曹潇 ,  吕新瑞 ,  赵力超 ,  张竟丰

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/06

Abstract: 本发明提供了一种快速定量检测VBNC状态副溶血性弧菌的方法，包括如下步骤：S1.诱导副溶血性弧菌进入VBNC状态；S2.生物素化多克隆抗体和免疫磁珠的制备；S3.免疫磁珠富集，免疫磁珠所需体积为10μL~200μL，副溶血性弧菌菌液所需体积为0.5~1mL；S4.PMAxx染色：在步骤S3富集后的样品中加入PMAxx使其终浓度达到10~20μmol/L，染色后进行检测。本发明提供了一种快速定量检测VBNC状态副溶血性弧菌的方法，首次将免疫磁珠技术、PMAxx染料以及qPCR定量检测技术相结合应用于实际样品免前增菌条件下VBNC状态菌的检测中。通过实验能够证明，该方法对VBNC状态副溶血性弧菌的检测限为1.05CFU/g，该方法不仅灵敏度高且特异性好。

公开(公告)号：CN109735481A

公开(公告)日：2019-05-10

申请号：CN201811584956.5

申请日：2018-12-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 赵力超 ,  吕新瑞 ,  张竟丰 ,  王丽 ,  曹潇

IPC: C12N1/36 ,  C12N1/20

Abstract: 本发明提供了一种VBNC状态阪崎肠杆菌的快速诱导形成方法，首先将阪崎肠杆菌接种后培养至对数期，得到培养液；然后使用抗生素与上述培养液进行诱导培养，诱导培养的操作为：取培养液离心，取沉淀，重悬，诱导培养浓度至108CFU/mL以下；其中，抗生素为氨苄青霉素，抗生素在诱导培养后的培养液中浓度为50~1600μg/mL。本发明提供的方法能够快速地诱导阪崎肠杆菌进入VBNC状态，同时采取常规培养复苏方法验证VBNC状态阪崎肠杆菌能够复苏，可恢复致病性。因此，本发明可为提高乳制品中阪崎肠杆菌检测的准确性奠定基础，有效地避免VBNC状态阪崎肠杆菌的存在而造成的潜在隐患。

公开(公告)号：CN111139281A

公开(公告)日：2020-05-12

申请号：CN202010032266.X

申请日：2020-01-13

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 赵力超 ,  吕新瑞 ,  王丽 ,  古晓奎 ,  张竟丰 ,  马宇昊

IPC: C12Q1/06 ,  C12Q1/04 ,  C12Q1/14 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/689 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明属于细菌检测技术领域，具体公开了一种基于微流控可视化技术精确测定特殊状态菌及其分选富集的方法。所述方法是将菌液利用微流控技术，形成微液滴。将生成的微滴培养后拍照，再通过人工计数或借助计算机技术等，将其计数，得到特殊状态菌的数量。同时，可对特殊状态菌进行分选和富集。相比较于现有的平板法计数，或只对膜完整的活菌进行计数，本发明准确性大大提升，突破了现有的对特殊状态菌的计数方式，能够及时有效地判断食品卫生状况，是消除食源性致病菌隐性残留造成食源性疾病的有效手段。同时，本发明方法能够对特殊状态菌进行富集和分选，降低研究过程中细胞异质性带来的结果误差，对研究细胞变化机制和研究菌的生长活动有较大的价值。